| 產品及特點 | 施馬倫貝格病毒（Schmallenberg Virus，SBV）是一種RNA病毒，是一種正本雅病毒屬的新病毒，感染癥狀為發熱、腹瀉、乏力等，感染此病毒的奶牛產奶量降低，以及新生幼畜出現缺陷等。目前還沒有發現它能感染人的證據，因此快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用，本產品以探針法熒光定量 RT-PCR 技術為基礎開發的專門檢測施馬倫貝格病毒的試劑盒。 它具有下列特點： 1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 RNA 模板。 2. 引物和探針經過優化，靈敏性高。 3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。 4. 特異性高，引物是根據施馬倫貝格病毒高度保守區設計，不會跟其他病毒 RNA 發生交叉反應。 5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應。 6. 本產品只能用于科研。 | ||
| 規格及成分 | 成分 | 編號 | 十孔盒包裝 |
| 探針法qRT-PCR緩沖液 | 190504a | 500 μL（藍蓋） | |
| 探針法qRT-PCR酶混合液 | 190504b | 100 μL（紅蓋） | |
| 熒光PCR 專用模板稀釋液 | 180701 | 1 mL（黃蓋） | |
| 施馬倫貝格病毒探針法qRT-PCR 引物混合液 | 15-90300yw | 100 μL（白蓋） | |
| 施馬倫貝格病毒qRT-PCR 探針 | 15-90300pb | 50 μL（棕色管） | |
| 施馬倫貝格病毒探針法qPCR陽性對照(1×10E8 拷貝/μL) | 60908-90300pc | 50 μL（黃蓋） | |
| 使用手冊 | 15-90300sc | 1 份 | |
| 運輸及保存 | 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。 | ||
| 自備試劑 | 樣品 RNA。 | ||
| 使用方法 | 一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。 由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原， 本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。1.標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。 2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。 3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供)，充分震 | ||
| | 蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 4. 換槍頭，在 6 號管中加入5μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E6 拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用 5. 換槍頭，在 5 號管中加入5μL 1×10E6 拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用 6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。二、樣品 RNA 的制備 7. 如果有 N 個樣品，最好設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性 對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 陽性對照的 10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為 NC。 8. 用自選方法純化樣品的RNA，本試劑盒跟市場上大多數RNA 提取試劑盒兼容。也可以向我公司購買柱式病毒RNAout。
三、Probe qRT-PCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行） 9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于 PCR 陽性對照（用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。 10. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設 置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好 后最后加） | |||
| 成分 | 樣品管 N+2 個 | PCR 陰性 對照管 | 標準曲線 樣品管（2-7 管） | |
| 探針法qRT-PCR緩沖液 | 各10μL | 10μL | 各10μL | |
| 探針法qRT-PCR酶混合液 | 各2μL | 2μL | 各2μL | |
| 施馬倫貝格病毒 qPCR 探針 | 各1μL | 1 μL | 各1μL | |
| 施馬倫貝格病毒探針法 qPCR 引物混合液 | 各2μL | 2 μL | 各2μL | |
| 待測樣本 RNA 模板 | 5 μL | - | - | |
| | 超純水 | - | 5 μL | - | |||||||||||||
| 第 7 步所得標準曲線樣品稀釋液 （2-7 號） |
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- | 各5μL（2 號樣到 2 號管，3 號樣到 3 號管…） | ||||||||||||||
| 11. 蓋上蓋子后上機，按下面參數進行 qRT-PCR：
四、數據處理 12. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品RNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。 4. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復一次。重復實驗的 Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于35，則為陽性。 | |||||||||||||||||
| 關聯產品 | 施馬倫貝格病毒可視化 LAMP 檢測試劑盒 | ||||||||||||||||
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