CFDA SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒(CFDA SE Cell Proliferation Assay and Tracking Kit)是研發(fā)的基于一種新型熒光探針CFDA SE的用于細胞增殖檢測和細胞熒光示蹤的檢測試劑盒。CFDA SE目前被廣泛用于替代MTT法或[3H]-thymidine摻入等其它細胞增殖檢測方法。

基于CFDA SE熒光標記的細胞增殖檢測和[3H]-thymidine摻入、BrdU標記獲得的檢測結果完全一致，但同時可以提供更多的細胞增殖信息。使用CFDA SE檢測可以提供整個細胞群中有多少比例的細胞分裂了1次、2次或更多次數(shù)，同時如果和其它熒光探針聯(lián)用，可以獲取不同分裂次數(shù)細胞的其它相關信息。
CFDA-SE的全稱為Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，分子式為C29H19NO11，分子量為557.47，CAS 
number為150347-59-4。CFDA SE可以通透細胞膜，進入細胞后可以被細胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發(fā)性地(spontaneously)并不可逆地和細胞內(nèi)蛋白的Lysine殘基或其它氨基發(fā)生結合反應，并標記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時，即可充分標記細胞。被CFDA SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標記的時間可達數(shù)個月。CFDA SE標記細胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均勻。
由于CFDA SE標記細胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細胞的熒光會減弱一半，這樣通過流式細胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細胞，分裂一次的細胞(1/2的熒光強度)，分離兩次的細胞(1/4的熒光強度)，分裂三次的細胞(1/8的熒光強度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細胞。采用CFDA SE通過流式細胞儀檢測獲得的檢測結果參考右圖。每一個峰代表一種分裂次數(shù)的細胞，從右至左的峰通常依次為分裂0次、1次、2次、3次等次數(shù)的細胞。分裂次數(shù)較多后，分裂0次或1次等沒有分裂或分裂次數(shù)較少的細胞會逐漸減少直至檢測不到。
使用CFDA SE可以檢測分裂多達8次或更多次數(shù)的細胞增殖。
目前CFDA SE標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。最常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可以用于成纖維細胞、NK細胞等其它細胞的增殖檢測，甚至還可以用于細菌增殖的檢測。
CFDA SE標記細胞呈綠色熒光，檢測時的激發(fā)波長可以選擇488nm，此時的發(fā)射波長為518nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 detection channel。CFDA SE標記的細胞也可以用熒光顯微鏡進行觀察。
CFDA SE標記的細胞無論在體外還是體內(nèi)都不會使鄰近細胞染色。即CFDA SE熒光探針完成標記后不會從一個細胞轉移到鄰近細胞。
CFDA SE標記細胞僅需5-15分鐘即可完成。對于不同細胞，最佳標記時間需自行摸索。
本試劑盒提供了配制CFDA SE所需的溶液以及CFDA SE進行細胞標記時所需的配套試劑。
如果每個檢測樣品的熒光探針標記體積為1ml，本試劑盒共可以檢測2000個樣品。

包裝清單：

保存條件：
-20℃保存，半年有效。其中CFDA SE需避光保存。
注意事項：
CFDA SE配制成儲存液后宜在一個月內(nèi)使用完畢，最長不宜超過2個月。CFDA SE易被水解，在水溶液中會很快變質(zhì)。請在使用過程中避免接觸水。在標記細胞的過程中和水接觸是在許可的范圍內(nèi)的。
CFDA SE溶劑在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。  

使用說明：
1. 檢測前的準備：
a. CFDA SE儲存液(1000X)的配制：用試劑盒中所帶的共2ml CFDA SE溶劑溶解CFDA SE，即可配制成CFDA SE儲存液(1000X)。配制完成后分裝到試劑盒所提供的原來裝CFDA SE溶劑的管子中，并做好標記。具體的操作步驟如下：取1ml CFDA-SE溶劑加入到CFDA SE中，充分溶解后取0.5ml至原1ml CFDA-SE溶劑管子中，再從另外一管CFDA SE溶劑中取0.5ml至該管中并混勻；取另外的0.5ml CFDA SE至另外一管0.5ml的CFDA SE溶劑管中并混勻。配制好的兩管CFDA SE儲存液均為1000X，-20℃避光保存，最好能-70℃避光保存。-20℃避光保存宜在一個月內(nèi)使用完畢，最長不宜超過2個月。-70℃避光保存可以適當延長使用時間。
b. CFDA SE細胞標記液的配制：準備適量無菌的細胞培養(yǎng)級純水，根據(jù)實驗需要配制適量的CFDA SE細胞標記液。例如，取20ml CFDA SE細胞標記液(10X)，加入180ml細胞培養(yǎng)級純水，混勻后即為CFDA SE細胞標記液。配制好的CFDA SE細胞標記液可以4℃保存，長時間不用可以-20℃保存。
2. 標記和檢測：
a. 用1ml CFDA SE細胞標記液懸浮100萬至500萬細胞，置于15ml離心管內(nèi)。
b. 用CFDA SE細胞標記液稀釋CFDA SE儲存液(1000X)至2X。例如取2微升CFDA SE儲存液(1000X)至1ml CFDA SE細胞標記液中，混勻后即為CFDA SE儲存液(2X)。
c. 把1ml CFDA SE儲存液(2X)加入到步驟2.a中含有1ml待標記細胞的15ml離心管內(nèi)，輕輕混勻。
d. 37℃孵育10分鐘。
e. 立即在15ml離心管內(nèi)加入約10ml完全細胞培養(yǎng)液(含血清)，室溫顛倒數(shù)下混勻。
f. 室溫離心去上清，再用5-10ml完全細胞培養(yǎng)液洗滌一次。
g. 再加入5-10ml完全細胞培養(yǎng)液，37℃孵育5分鐘，以促進CFDA SE在細胞內(nèi)的駐留及未反應的CFDA SE進入完全細胞培養(yǎng)液。離心去上清，完成最后一次洗滌。
h. 隨后即可按照細胞的正常培養(yǎng)方法進行培養(yǎng)。可以在熒光顯微鏡下直接觀察標記效果，也可以在培養(yǎng)適當時間后用流式細胞儀檢測細胞增殖，或用于特定目的的細胞示蹤。標記的細胞也可以用于活體動物的移植，并用熒光進行示蹤。標記的細胞呈綠色熒光。
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