正式測定前取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
植物花色苷測試盒測定意義：
花色苷是一類易溶于極性溶劑的天然色素，屬黃酮類化合物。花色苷廣泛存在于植物的根、
莖、葉、花和果實中，使其呈現由紅到紫等不同顏色，是植物主要的呈色物質。
測定原理：
采用 pH 示差法測定花色苷含量，當 pH 為 1.0 時花色苷在 530nm 處有最大吸收峰,而當 pH
為 4.5 時,花色苷轉變為無色查爾酮形式,在 530 處無吸收峰, 利用此特性分別測定在不同
pH 下的 530nm 和 700nm 處的吸光度值。pH 示差法減少了溶液 pH 和溶劑差異的影響，排除了
其他非花色苷類物質對檢測結果的干擾。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體 100 mL× 1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 20 mL× 1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 20 mL × 1 瓶，4℃保存；
花色苷的提取：
按照烘干樣品質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 烘干樣品，
加入 1mL 提取液），充分勻漿后轉移到 EP 管中，提取液定容至 1 mL，蓋緊后 4℃浸提 24 h，
8000 g，常溫離心 10 min，取上清液待測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上；試劑一和試劑二預熱 10min 以上；
2、取 20 µL 上清液和 180 µL 試劑一（相當于稀釋 10 倍），靜置 15min，分別測定 530nm 和
700nm 處的吸光值，分別記為 A1 和 A2。
3、 取 20 µL 上清液和 180 µL 試劑二（相當于稀釋 10 倍），靜置 15min，分別測定 530nm
和 700nm 處的吸光值，分別記為 A3 和 A4。
4、 計算△A=(A1-A2)-(A3-A4)
注意：如果A1大于1，可以適當加大稀釋倍數，保證總體積200 µL不變，如10 µL上清液和
190 µL試劑一（相當于稀釋20倍）；如果A1小于0.1，可以適當縮小稀釋倍數，保證總體積不
變，如100 µL上清液和100 µL試劑一（相當于稀釋2倍），使A1保持在0.1~1范圍內，可提高
檢測靈敏度；同樣調整上清液和試劑二體積比例；計算時以實際稀釋倍數代入下述公式中。
花色苷含量計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
花色苷含量（µg/g 干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×106
]÷W=16.7×ΔA× F÷W
V：提取液體積，1×10-3
L；ε：花色苷的摩爾消光系數，2.69×104
L / mol /cm；d：比色皿光
徑，1cm；M：花色苷的相對分子質量：449.2g/mol；F：稀釋倍數；106：1g=106
µg；W：樣
本干重：g。
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
花色苷含量（µg/g 干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×106
]÷W=33.4×ΔA× F÷W
V：提取液體積，1×10-3
L；ε：花色苷的摩爾消光系數，2.69×104
L / mol /cm；d：96 孔板光
徑，0.5cm；M：花色苷的相對分子質量：449.2g/mol；F：稀釋倍數；106：1g=106
µg；W：
樣本干重：g。
注意：最低檢測限為 0.2μg /g 干重
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