注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
植物酚類物質具有清除自由基,抗氧化抗衰老的作用,具有較高的營養(yǎng)價值和醫(yī)療保健作用而廣泛應用于化妝品、食品、醫(yī)藥等領域。
測定原理:
在堿性條件下,酚類物質將鎢鉬酸還原,產生藍色化合物,在760nm處有特征吸收峰,測760nm處的吸光值,即可得樣品總酚含量。
自備實驗用品及儀器:
天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:60%乙醇,自備。
試劑一:液體6mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。
總酚提取:
將樣本烘干至恒重,粉碎,過40目篩之后,稱取約0.1g,加入2.5mL提取液,60℃振蕩提取2h。10000g,25℃,離心10min,取上清,用提取液定容至2.5mL,待測。
測定操作表:
| 對照管 | 測定管 |
樣本待測液(µL) | 50 | 50 |
試劑一(µL) |
| 250 |
混勻,25℃靜置2min | ||
試劑二(µL) | 250 | 250 |
H2O(µL) | 700 | 450 |
混勻,25℃靜置10 min,對照管調零,1mL比色皿,測定A760。 |
總酚含量計算公式:
標準曲線:y = 5.615x+0.0012,R2 = 0.9994
總酚含量(mg/g 干重)=(A760-0.0012)÷5.615×V樣÷(V樣÷V樣總×W)
= 0.445×(A760– 0.0012 )÷W
V樣總:加入提取液體積,2.5mL; V樣:反應中樣品體積,0.05mL; W:樣品質量,g