一、細胞培養條件

英文名稱	Hmc-1	中文名稱	人肥大細胞
生長特性	圓形、懸浮	凍存條件	無血清凍存液
培養體系	IMDM+10%FBS
傳代方法	1:2-1:3,第一次建議1:2傳代	傳代情況	2~3天換液/傳代
備注	來源52歲男性肥大細胞白血病患者的外周血樣本。   該細胞有多重亞型分別為：HMC-1 5C6，HMC-1.1 ，HMC-1.2 。廣泛用于人肥大細胞功能研究，因為它們表現出組織肥大細胞的許多關鍵特征，例如組胺、類胰蛋白酶、肝素和類似細胞表面抗原譜的表達 （1,2）。受體酪氨酸激酶KIT在肥大細胞上表達，在肥大細胞的增殖、功能和存活中起重要作用。KIT中的激活突變與肥大細胞生長失調有關，并與肥大細胞腫瘤和系統性肥大細胞增多癥有關。據報道，HMC-1細胞系中存在兩個KIT激活點突變 。這兩種突變都將受體轉化為組成型酪氨酸磷酸化和活性狀態，導致生長因子非依賴性增殖。HMC-1.1 （HMC-1（560）） 和 HMC-1.2（HMC-1（560,816））是HMC-1 細胞系的兩個變異亞系。HMC-1.1 具有 V560G 突變，但不具有 D816V 突變。HMC-1.2 同時具有 V560G 和D816V 突變，并且表現出比 HMC-1.1 更高的增殖率。有人認為，HMC-1.2 的較高增殖潛力可能歸因于D816V突變。

二、細胞收到后處理

 收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置若干小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態，100×，200×各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行售后的依據。

細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，加入6ml完全培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。（注意發貨的是密封培養瓶的話，放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松）

三、細胞培養步驟

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

1、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右完全培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

3）細胞凍存：

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；

4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃。