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發布時間：2020/11/2 7:56:56 閱讀次數：765
規格：100管/96樣
微量法丙二醛(malondialdehyde，MDA)試劑盒說明書
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質；后者逐漸分解為一系列復雜的化合物，其中包括MDA。通過檢測MDA的水平即可檢測脂質氧化的水平。
測定原理：
MDA與硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成紅色產物，在532nm有最大吸收峰，進行比色后可估測樣品中過氧化脂質的含量；同時測定600nm下的吸光度，利用532nm與600nm下的吸光度的差值計算 MDA 的含量。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配置：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 30mL×1 瓶，4℃保存；
注意事項：
臨用前注意試劑一是否完全溶解，如未溶解，可以70℃加熱，并振蕩以促進溶解。
MDA 提取：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
微量法丙二醛(malondialdehyde，MDA)試劑盒說明書測定步驟：
1、吸取0.3mL試劑一于1.5mL離心管中，再加入0.1mL樣本, 混勻。
2、95℃水浴中保溫30min（蓋緊，防止水分散失），置于冰浴中冷卻，10000g，25℃，離心10min。
3、吸取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中，測定532nm和600nm處的吸光度，記為A532 和A600，ΔA= A532-A600。
MDA 含量計算：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）中 MDA 含量的計算：
MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣=25.8×ΔA
2、細菌、細胞或動物組織中 MDA 含量計算
（1）按照蛋白濃度計算
MDA含量(nmol/mg prot)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 樣)=25.8×ΔA ÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。
（2）按照樣品質量計算
MDA含量(nmol/g 鮮重)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W×V樣÷V樣總)
=25.8×ΔA ÷W
(3 ) 按照細菌或細胞密度計算：
MDA含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)=0.0516×ΔA
V 反總：反應體系總體積， 4×10-4L；ε：丙二醛摩爾消光系數，155×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.1 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500萬。
b.用96 孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）中 MDA 含量的計算：
MDA含量(nmol/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣=51.6×ΔA
2、細菌、細胞或動物組織中 MDA 含量計算
（1）按照蛋白濃度計算
MDA含量(nmol/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 樣)=51.6×ΔA÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。
（2）按照樣品質量計算
MDA含量(nmol/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W×V樣÷V樣總)=51.6×ΔA÷W
(3 ) 按照細菌或細胞密度計算：
MDA含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)=0.1032×ΔA
V 反總：反應體系總體積，4×10-4L；ε：丙二醛摩爾消光系數，155×103L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.1 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500 萬。微量法丙二醛(malondialdehyde，MDA)試劑盒說明書
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