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客戶細胞培養過程中常見的問題說明

發布時間：2021/6/17 9:27:32 閱讀次數：572

通過多次與客戶的了解和反饋，的售后服務人員發現，客戶在收到經過專業包裝的細胞后，由于沒有經過系統專業的檢查和處理，就直接進行實驗，以致于后期容易產生了一系列問題。鑒于客戶對這一方面的知識有所欠缺薄弱，技術人員經過總結，對于在收到細胞怎樣專業處理做了以下說明：

一、問：細胞收到之后怎么處理？

答：常溫運輸的細胞

首先觀察包裝是否完好，瓶口是否漏液，然后顯微鏡先拍攝4x 、10x、 40x不同倍數下的照片各兩張。放入培養箱穩定兩小時后開始換液，貼壁細胞把培養基全部吸去，加入6ml新的完全培養基，懸浮細胞離心后，用6ml完全培養基重懸細胞。注意細胞的培養環境。

低溫運輸的細胞，通常是用干冰寄送。

客戶收到細胞后，觀察干冰是否揮發，細胞是否溶解。沒有問題可以直接放入液氮罐保存（長時間），或者超低溫冰箱（不超過一周）。

        二、問：細胞凍存后，復蘇效果不好？
        答：目前還有很多人采取4°、﹣20°各半小時再轉入-80°冰箱，這方法不好控制，有的細胞適合，有的細胞就達不到理想效果。現可采用程序降溫盒來凍存，降溫盒內添加的異丙醇可以達到每分鐘降一度的要求，操作也簡單。
       凍存液采用90%血清+10%DMSO。部分低分化或干細胞可以添加馬血清凍存，另外可以先將凍存液配置成80%血清+20%DMSO,重懸細胞時用血清重懸，避免直接用DMSO對細胞吹打造成損傷。
       三、問：細胞有黑點怎么回事？
       答：這種情況可能性就比較多了，首先判斷黑點是在細胞表面，還是胞質內，還是在細胞外。細胞表面黑點增多可能是因為狀態變差，可能是培養條件不適合導致，或者細胞活性降低。細胞質內黑點增多，先確認是否是多核細胞。細胞外有黑點，黑點游動則可能是細菌污染，不游動但隨著培養時間增長黑點數量增多，應該檢測是不是支原體污染，懸浮細胞多數有黑點，可能是碎片，可低速離心去除。腺癌多數是分泌因子，看著黑點增多。
       四、培養基，血清怎么選？
       答：最好和細胞來源用的什么品牌使用相同的血清。基礎培養基進口和國產差別不大。專業的細胞公司使用的血清都是經過了大量細胞培養驗證的，不要輕易更換，目前國內血清品牌較多，質量不齊。