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大鼠、小鼠心臟干細胞(祖細胞)分離培養方法

發布時間:2021/6/17 9:28:32      閱讀次數:494

  心臟病是引起人類死因的一種代表性疾病,如果失去了心肌細胞,就會引起心力衰竭等心臟疾病。心肌細胞幾乎沒有再生能力,一旦失去就不能再生。從前認為心臟當中沒有干細胞,所以心肌沒有再生能力,但是近年的研究表明,成體心臟內部也會存在一些心肌干細胞。公司開發出一種新型心肌干細胞培養方法,希望能為這項研究的科學工作者提供幫助。

     

       細胞培養操作:
       1.摘取出心臟,去掉心臟包膜,把心尖部分剪下來(心尖部分是心室部分,心肌細胞含量高)。
       2.剪碎,移入15或50ml離心管中,用PBS多洗幾遍,盡量把血細胞洗掉。
       3.加入2-3ml的50%血清+50%IMDM培養基,37℃、一小時浸泡。
       4.采用貼塊法:用槍把組織塊連同培養基一同移入T25瓶中,然后用槍吸出培養基。在培養箱中放置1-2小時,待組織粘貼在瓶底后,加入3ml含20%血清的IMDM培養基。
       5.在貼塊培養到第三、四天時,從組織塊上會脫落一些細胞團和單個細胞,收集到15ml離心管中。
       6.采用300rpm離心(或自然沉淀),去上清,取沉淀部分的細胞培養(多為細胞團)。
       7.用IMDM/DMEM/F12完全培養基培養:10%血清、30%IMDM、60%DMEM/F12、0.1mM β-ME、50xB27、20ng/ml bFGF、10ng/ml EGF。
       8.細胞團中的細胞在第二天就會出現圓形擴散生長(呈集落生長,像太陽發光的模樣),細胞形態不像成纖維細胞那樣呈梭形狀,而是有些偏圓。

       9.心臟干細胞生長速度很快,兩三天就能長滿。



 

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