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發布時間：2021/6/17 16:45:43 閱讀次數：738
一、抗原熱修復溫度和時間的關系
我們日常工作中所使用的組織固定液福爾馬林會引起組織蛋白內或蛋白之間的亞甲基發生橋連，具體過程如下：
第一步：基本反應福爾馬林和氫反應形成新的化合物；
第二步：基本反應福爾馬林和氫反應形成新的亞甲基橋。
上述反應的結果導致許多抗原決定簇被封閉，而加熱可以水解該橋連使抗原被激活。影響抗原熱修復的兩個最關鍵的因素是溫度和時間，有人將這兩種因素對抗原修復的影響總結為下面的公式： 抗原熱修復的有效性=加熱溫度（T） × 加熱時間（t）。
也就是說當我們修復時的溫度越低則需要修復的時間就越長；反過來當修復溫度增高時修復的時間可以適當地縮短，才能使抗原決定簇完全暴露，這種反比的關系從MBI單克隆抗體的實驗結果“表1”中也可以清楚地看出。
如果修復強度不夠，免疫組織化學染色所顯示的只能是修復后暴露的部分抗原決定簇，而不是組織所含的全部抗原。這樣的染色結果可能會非常弱，或出現假陰性，即使是陽性結果，充其量只能起到定性的作用，不能適應今后對免疫組化進行定量的需要。這就給我們診斷中定量指標的應用帶來困難，例如用來測定耐藥的指標。
大量的實驗表明，固定時間越長的標本，它所形成的橋連就越緊密，抗原就越難以被激活，所需要的修復強度也就越強。有意思的是隨著固定時間的延長，組織中蛋白對溫度的耐受也相應增高，這可能就是我們對固定時間長的標本加大修復強度的理論基礎。
這就提醒我們在做回顧性的研究時一定要注意所使用的修復條件，它與新鮮標本的修復條件一定是有所區別的，同等條件下一定要加長修復的時間或提高修復所使用的溫度，才可能得到比較滿意的結果。
抗原熱修復中所使用的修復液pH值也會對染色結果產生相當大的影響。
pH值對染色結果的影響大概可以分為以下四種情況：
A.穩定型，pH值對染色結果影響不大，如PCNA、AE1、EMA、CD20等；
B.V型，高pH值和低pH值染色較好，而pH值4-5染色結果較差，如ER、Ki-67等；
C.上升型，隨著pH值的增加，染色結果逐漸增強，如HMB45等；
D.下降型，隨著pH值的增加染色結果逐漸減弱，當然這種類型的抗體只是個別的現象，如MOC31。
一個有趣的現象值得注意，即在高pH值都有較好的染色結果，所以目前比較推崇的抗原修復液為高pH值得修復液，如1mMEDTA, pH8.0或pH9.0等。但是由于傳統習慣，絕大多數醫院和實驗室都在使用pH6.0的枸櫞酸緩沖液。綜合以上各種抗體的染色狀況，考慮到臨床工作的實際情況，許多國外免疫組化專家建議，在常規的免疫組化工作中，全部選用高pH值得修復液來代替目前廣為使用的pH6.0枸櫞酸緩沖液。為此，本公司已經推出pH8.0和pH9.0的新型抗原修復液。經驗證，絕大多數的抗體使用pH9.0得修復液效果都要優于pH6.0的枸櫞酸，尤其是核陽性的抗體。所以，在常規的免疫組化工作中，使用高pH值的抗原修復液是今后的必然趨勢。
目前抗原熱修復所采用的方法主要有微波爐修復和高壓鍋修復兩種，從“表2”中可以看出，由于高壓鍋修復具有溫度均一、節省時間、效果穩定等特點，已經越來越受到人們的青睞。
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