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雅吉質粒擴增說明書

發布時間：2021/7/29 11:21:55 閱讀次數：718

一、產品信息

產品形式	運輸方式	保存溫度	保存期限
★質粒干粉	常溫	-20度	90天
菌落平板	冰袋	4度	7天
穿刺菌	冰袋	4度	7天
甘油菌	冰袋	-80度	90天
液體質粒	冰袋	-20度	90天

二、擴增流程
收到產品后，請先根據產品管壁標簽來判斷產品形式，并在擴增前準確查找該質粒的抗性、感受態和培養溫度。
1、質粒干粉（請務必轉化挑單克隆重提后使用）
  ①收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min，再加入20μl 無菌水溶解質粒；
  ②取2μl質粒加至100μl 感受態中，冰浴30min后，42℃熱激90s，再冰浴2min；
  ③加入900μl無抗的LB液體培養基，180rpm震蕩培養45min；
  ④6000rpm離心5min，僅留100ul上清混勻菌體沉淀，并全涂至對應抗性LB平板上；
  ⑤將平板正向培養1h，再倒置培養14-16h。如果是30度培養則培養20h；
（如果第二天菌落過多，請將質粒稀釋后再轉化。如果第二天無菌落，請加入10μl質粒轉化）

  ⑥挑取單菌落至LB液體培養基中，加入抗生素，37℃震蕩培養14~16h，根據實驗需要提取質粒。
  2、甘油菌：四區劃線后挑單菌落培養，酵母菌需要先液體復蘇。
  3、穿刺菌：穿刺接種后四區劃線，挑單菌落培養。
  4、平板：直接挑單菌落液體培養。
  5、液體質粒：單獨提取的液體質粒收到后可直接使用。

三、轉化圖片