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發布時間：2021/12/29 9:28:02 閱讀次數：1236
SY5Y)。如今，SH-SY5Y細胞已經是腦科學研究中最常用的細胞系之一了。
但很多人在SH-SY5Y細胞培養的過程中，總會遇到各種問題。今天，來為大家一 一解答。
SH-SY5Y細胞基本信息
SH-SY5Y細胞培養常見問題及解決方案
收貨篇
常溫運輸過程中，細胞不免受到震蕩和溫度變化的影響，出現皺縮、聚團甚至脫落的現象。遇到這種情況，不用緊張，只要正確處理，細胞就能恢復正常生長。
收貨時皺縮
常溫細胞收貨后，把細胞放進細胞培養箱靜置2-4小時即可。如果4小時后細胞仍然沒有鋪展開，密度適中的前提下可以靜置過夜（過夜前倒出部分培養基，留5-10mL在瓶中，瓶蓋擰松）。
收貨時聚團
常溫細胞收貨后，先把細胞放進細胞培養箱靜置2-4小時以穩定狀態，再進行傳代。傳代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。
收貨時脫落
常溫細胞收貨后，先把細胞放進細胞培養箱靜置2-4小時以穩定狀態再處理。脫落后的細胞通常聚團漂浮，通過離心將漂浮的細胞團收集起來，在離心管里進行胰酶消化后重新鋪板即可。
貼壁細胞常規方法消化下來，和處理好的脫落細胞合并，混勻后鋪板。
SH-SY5Y脫落處理步驟：
1. 1200rpm（約250g）3min離心收集細胞，去除舊培養基；
2. PBS 重懸細胞，再次 1200rpm（約250g）3min離心，去除PBS；
3. 加入 1mL左右 0.25%胰酶重懸細胞，吹打1-2下吹起沉淀即可；
4. 放入細胞培養箱約 1-3min；
5. 用移液槍輕輕吹打細胞懸液，使細胞團分散；
6. 迅速加入 3-5mL含血清的培養基混勻以終止消化；
7. 1200rpm（約250g）3min離心，去除胰酶；
8. 加入新鮮培養基按合適比例接入無菌培養器皿中；
SH-SY5Y細胞收貨時皺縮、脫落
SH-SY5Y細胞處理后第三天
SH-SY5Y細胞培養篇
SH-SY5Y細胞生長緩慢。在細胞培養過程中，有以下幾點需要注意。
能否使用DMEM/F12
MEM/F12和DMEM/F12都可以培養SH-SY5Y細胞培養，并且都有相應的文獻支持。但這兩種培養基培養出來的形態會有細微差異。 另外，使用品質好的胎牛血清將極大改善細胞生長狀態。
培養基容易變黃
因其神經母細胞瘤的特性，SH-SY5Y細胞成簇生長，飽和密度大。有時顯微鏡下看著密度不高，但細胞簇實際密度大，所以細胞培養基很快就變黃了。這時候，需及時換液。
生長異常緩慢
當SH-SY5Y細胞培養一周都無法傳代時，可以將細胞消化下來，接種到更小的容器中，人為增加細胞密度，從而促進細胞生長。平時傳代時也要注意接種密度不能太低。
傳代注意事項
不建議連續消化細胞，連續消化細胞會導致細胞狀態變差。傳代時消化時間不宜過長，通常1-3min即可，若細胞解離太快可適當用PBS稀釋胰酶。吹打細胞時，動作輕緩一些，減少對細胞的物理刺激。
SH-SY5Y正常生長照片
形態篇
SH-SY5Y細胞培養時，貼壁細胞和懸浮細胞同時存在，貼壁細胞呈上皮樣，有短觸角延伸出來，傾向于成簇生長，容易成團。
懸浮細胞過多：SH-SY5Y細胞生長時有少量懸浮細胞，是正�，F象。 如果出現大量懸浮的細胞，就需要引起注意了。
處理方法：換液時將懸浮細胞離心收集，新鮮培養基重懸后接種回原瓶/原皿。當貼壁細胞生長狀態良好、密度適中時，可以舍棄懸浮細胞。
成團嚴重：SH-SY5Y細胞非常敏感，在受到溫度、化學或物理刺激后容易出現成團現象。一個視野下，有少量成團現象，無需特殊處理。成團幾乎沒有鋪展開的細胞時，就需要按以下方法特殊處理一下了。
成團較嚴重的SH-SY5Y細胞
處理方法
方法1：低密度接種，用0.125%的低濃度胰蛋白酶消化細胞（時間不超過5min），按1：6比例傳代接種，并換新的培養器皿。 延長換液時間，3天換液一次，防止細胞脫落。
方法2：使用多聚賴氨酸包被的培養器皿，以加快細胞貼壁速度，降低細胞聚集成團的幾率。
方法3：重新鋪板，并更換新配制的培養基，并加大血清比例（不超過20%）
方法4：接種時，減少培養基量（如T25加3mL）以加快細胞貼壁速度，等待細胞貼壁后（約8-12小時），再補加培養基。
預防成團的方法：
Ø 控制細胞密度不超過80%，當密度到達或超過80%及時傳代；傳代時切勿暴力吹打，避免對細胞造成機械刺激
Ø 使用質量好的細胞培養基和胎牛血清，減少內毒素等有害物質對細胞的刺激
Ø 請勿頻繁把細胞從培養箱拿出，氣溫低時需開暖氣維持細胞房溫度；使用PBS、培養基前37度預熱，以避免溫差對細胞造成刺激
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