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發布時間：2022/3/10 13:36:51 閱讀次數：995
本期將主講有限傳代細胞，及其代次管理方法。快來查收吧！
如有疑惑，請在文末留言。 #常見的有限傳代細胞 有限傳代細胞屬于二倍體細胞，它的核型相對穩定，與生物體細胞特性更加相似，其對代次要求也更高。因有限傳代細胞的分裂存在一個極限，所以在達到該極限值后，細胞將不再繼續分裂，并會導致衰老、死亡，不能進行無限增殖。 常見有限傳代細胞如表1所示： 貨號 名稱 中文名稱 理論 代次 CL-0161 MRC-5 人胚肺細胞 ~60 CL-0243 WI-38 人胚肺細胞 ~60 CL-0106 HFL1 人胚肺成纖維細胞 ~60 CL-0538 IMR-90 人胚肺成纖維細胞 ~60 CL-0657 PUMC-HUVEC-T1 SV40T轉化 人臍靜脈內皮細胞 ~60 CL-0056 CCD-1095Sk 人乳腺浸潤性 導管癌旁皮膚細胞 ~10 表1. 常見有限傳代細胞 注意： 有限傳代細胞應在細胞理論代次前2/3使用（如MRC-5，一般40代前狀態較好）。 #為什么細胞有傳代限制 1965年，微生物學家Leonard Hayflick提出海夫利克極限，該實驗中發現了人體細胞分裂次數上限為“56”， 被認為是機體衰老的原因。 1975年，Elizabeth H.Blackburn等人發現端粒，其由簡單的DNA高度重復序列組成，保證每條染色體的完整性，而端粒的長度反映了細胞復制史及復制潛能。 正是因為端粒限制著細胞分裂次數，所以傳代培養的細胞有了傳代限制。同時，對于不同物種細胞體外培養代次也有所不同，如表2所示。 動物 細胞群體倍增次數 龜 90~120 人 40~60 小鼠 14~28 表2. 體外培養的胚胎成纖維細胞的平均培養代數 以上就是有限傳代細胞的基本信息。接下來，我們講一下它的代次管理！ #為什么要進行代次管理 細胞狀態 有限傳代細胞會衰老，其細胞形態特征和生長速度等會發生變化。 遺傳特性 有限傳代細胞隨著傳代次數的增多，在傳代過程易產生遺傳漂變，基因/蛋白表達發生變化。 細胞庫管理 細胞庫管理屬于細胞庫分級管理標準之一，而代次管理屬于細胞庫管理內容之一。 #代次計算 對于有限傳代細胞代次的計算，我們可以采用記錄細胞群體倍增數（PDL）的方法。 公式如下： PDL =X+3.322(log Y – log I) X為傳代前代次，I 為細胞接種前細胞數，Y 為培養后細胞總數。 注意： 1. 常規培養時，1:2傳代代次+1，1:3傳代代次+1.5； 2. 擴增培養記錄接種細胞量以及收獲細胞量，根據公式計算代次。 #細胞代次管理 細胞的代次管理，共有以下三個步驟： 細胞引進 當我們得到一個新的細胞，就要記錄該細胞的初始代次。 擴增培養 對細胞進行擴增培養時，可以根據傳代過程記錄代次。 分級凍存 在進行細胞凍存時，可以根據不同級別凍存庫，對細胞代次進行控制。 注意： 1. 常規培養時按照1:2傳代，記錄每次傳代后代次； 2. 凍存細胞根據細胞數量計算細胞代次，最后凍存的批次進行傳代數檢測。 #有限傳代細胞傳代測試 在進行細胞復蘇后，以一定密度接種至孔板培養，每次密度達到80%傳代，需記錄傳代次數及傳代間隔。（要求：在預計傳代次數內，細胞形態無明顯差異，傳代時機間隔無明顯變化。） 如測試后未達到預期傳代數，可進行細胞衰老檢測。 細胞衰老檢測方法 在進行檢測時，我們常用到細胞衰老β-半乳糖苷酶檢測試劑盒。細胞在PH值為6時，β-半乳糖苷酶陽性率隨代齡增加而逐漸上調。衰老細胞/組織產生的β-半乳糖苷酶可以催化底物X-Gal生成藍色產物（如下圖所示）。
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