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土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)分光法試劑盒

發(fā)布時間:2022/8/8 12:15:30      閱讀次數(shù):495

 注意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

貨號YX-C-SNAG

規(guī)格50T/24S

產(chǎn)品內(nèi)容:

試劑一:液體40mL×1瓶,4℃保存;

試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入3mL 丙酮溶解,用不完的試劑仍-20℃保存; 試劑三:液體60mL×1瓶,4℃保存;

標(biāo)準(zhǔn)品:液體1mL×1支,5 mmol/L的對硝基苯酚溶液,4℃保存。臨用前用試劑一將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋50倍得100µmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

產(chǎn)品說明:

土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)是土壤微生物分泌的溶酶體中的一種酸性水解酶。其活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。

S-NAG分解對硝基苯β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計(jì)算NAG活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、30-50篩(或更小)和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理:

新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干,過30-50目篩。二、測定步驟:

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min,波長調(diào)至400nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 加樣表:

試劑名稱

測定管

對照管

標(biāo)準(zhǔn)管

空白管

風(fēng)干土樣(g

0.1

0.1

-

-

試劑一(µL

550

550

-

-

試劑二(µL

50

-

-

-

混勻, 37℃水浴1h 后,立即沸水浴5min蓋緊,

防止水分散失,流水/冰浴冷卻。

-

-

試劑二(µL

-

50

-

-

12000g 25℃離心10min,取上清液

-

-

上清液(µL

500

500

-

-


標(biāo)準(zhǔn)品(µL

-

-

500

-

蒸餾水(µL

-

-

 

500

試劑三(µL

1000

1000

1000

1000

室溫靜置2min 后,10000g 常溫離心5min,取上清測定400nm處的吸光值A。分別記為A測定管、A對照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計(jì)算∆A=A 測定管-A 對照管,∆A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個測定管設(shè)一個對照管。

三、S-NAG 活力計(jì)算:

單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1 µmol 對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-NAG活力(U/g 土樣)=∆A÷ (∆A標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V 反總÷W÷T =1.44× A÷ ∆A標(biāo)準(zhǔn)÷W

T:反應(yīng)時間,1h=1/24dV 反總:反應(yīng)體系總體積:6×10-4 LC標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,100µmol/L W:樣本質(zhì)量,g

注意事項(xiàng):

當(dāng)∆A 大于 1 時,建議將上清液稀釋后進(jìn)行測定;當(dāng)∆A 小于 0.02 時,建議延長反應(yīng)時間。計(jì)算公式中注意乘以稀釋倍數(shù)或注意反應(yīng)時間變化。


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