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發布時間：2022/9/1 9:29:20 閱讀次數：420
培養條件
培養液：MEM(含NEAA)＋10% FBS＋1% P/S 二氧化碳培養箱：穩定的溫度（37℃），穩定的CO2水平（5%） 傳代比例和頻次:推薦1:3~1:5傳代，每3~4天傳代一次 細胞類型:小膠質細胞 形態學:巨噬細胞 具體應用 神經科學，神經炎癥 轉化的人小膠質細胞代表可以無限生長的同質細胞群，并且可以用于小膠質細胞功能的生化分析的便捷系統。正如實驗所證明的，它們還可以進行轉染，這對研究小膠質細胞中各種轉染基因的表達調控有重要意義。 培養注意事項 1.2-3天換液一次； 2.培養過程中可能會有細胞碎片產生，及時換液除去即可。 傳代步驟 1.吸出原培養液； 2.加入2mL左右PBS，輕輕晃動培養瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄； 3.加入1mL左右胰酶，輕輕晃動培養瓶，使之浸潤所有細胞； 4.放入培養箱消化，消化2-3分鐘，輕拍培養瓶側壁，顯微鏡下看到細胞脫壁且聚集的細胞團松散開后，可終止； 5.加入3mL含血清的培養基，終止消化，吹打細胞使之脫壁，并在液體里反復吹打，使細胞混勻為懸浮液，這時可以在顯微鏡觀察； 6.收集細胞懸液離心，1200rpm/min 3分鐘，離心完吸出上清丟棄； 7.加入新鮮培養基，吹打幾下混勻細胞即可；按需接種到新培養瓶，補足培養基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養； 8.檢查培養箱二氧化碳、溫度和水盤。 換液步驟 1.吸出舊培養基，用PBS進行潤洗，然后加入新的培養基； 2.每2~3天換液一次。 凍存步驟 1.配制凍存液，凍存液推薦配比：55%（基礎培養基DM/F12）+40%(血清)+5%（DMSO）； 2.DMSO配制的時候會發熱，一定要等凍存液冷卻后使用，避免灼傷細胞； 3.細胞消化下來制成細胞懸液； 4.1200rpm 3分鐘離心后去上清，盡量吸干凈上清； 5.加入配制好的凍存液重懸，建議一個T25長滿，凍存1支，或者細胞計數后，按照3~5×106cells/支凍存； 6.分裝好的凍存液轉入程序凍存盒，放入-80℃冰箱過夜； 7.從-80℃冰箱取出凍存管，并迅速轉移到液氮長期保存。 復蘇步驟 1.將水浴鍋預熱至37℃，準備好干凈的一次性PE手套，向一個無菌離心管內加入5mL無菌培養基； 2.將細胞從液氮罐中取出，放入PE手套中，迅速沒入水浴鍋，搖晃凍存管，使細胞快速溶解，以1分鐘內全部溶解為宜； 3.在超凈臺中，將復蘇好的細胞液加入到裝有新鮮培養基的離心管內，1200rpm/min離心3分鐘，離心完畢去掉上清； 4.取適量專用完全培養基重懸細胞，接入到無菌容器中（培養瓶或培養皿），補充培養基到適宜，放入培養箱培養； 5.溶解過程要快，已溶解的凍存細胞在常溫中盡量短時間存放，盡快離心去除DMSO
背景介紹:HMC3細胞系，是通過人胎腦源性原代小膠質細胞培養物的 SV40 依賴性永生化建立的，靜息 HMC3 細胞的小膠質細胞/巨噬細胞標志物IBA1呈強陽性，星形膠質細胞標志物GFAP呈陰性。活化小膠質細胞的標志物，即MHCII、CD68 和 CD11b，在靜息 HMC3 細胞中呈陰性，但在被 IFN-γ（10ng/mL，24 小時）激活后上調。
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