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發布時間：2022/9/1 9:34:11 閱讀次數：351
K7M2-WT(小鼠骨肉瘤成骨細胞)在Balb/c小鼠中形成腫瘤，在超過90%的接種小鼠中自發轉移到肺部。K7M2-WT細胞抗原表達：Ⅷ因子、整合唾液酸蛋白(BSP)、二聚糖、飾膠蛋白聚糖、絨毛蛋白。此外，骨唾液酸蛋白、二聚糖、飾膠蛋白聚糖和骨調素的表達顯示K7M2-WT細胞骨家族細胞特性。
生長培養基 | DMEM＋10% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
倍增時間 | ~31小時 |
細胞形態 | 成骨細胞樣 |
生長特性 | 貼壁細胞 |
凍存條件 | 55% 基礎培養+40%FBS+5%DMSO |
培養條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
細胞復蘇 01：將水浴鍋預熱至37℃，準備好干凈的一次性手套，將細胞從液氮罐中取出，放入一次性手套中，迅速沒入水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以一分鐘內全部溶解為宜； 02：將解凍的細胞放入裝有新鮮培養基的離心管中，打開蓋子前，用75%酒精擦拭凍存管外部； 03：1200rpm離心3分鐘左右，離心完畢后去掉上清； 04：取適量與細胞配套的完全培養基重懸細胞，并接入到無菌容器中，補充一定量培養基，再放入培養箱培養。 細胞凍存 01：配置凍存液。由于DMSO配置時會發熱，一定要等凍存液冷卻后再使用，避免灼傷細胞； 02：細胞消化好后用新鮮培養基終止，制成細胞懸液，1200rpm離心3分鐘左右，盡量吸盡上清； 03：加入配置好的凍存液，調節濃度至大約1×106個細胞/mL，分裝到細胞凍存管； 04：分裝好的凍存液轉入程序凍存盒，放入-80℃冰箱過夜； 05：從-80℃冰箱取出凍存管，并迅速轉移到液氮長期保存。 細胞傳代 1：將培養基吸出丟棄，加入2mL PBS潤洗； 2：吸出PBS丟棄，加入2mL胰酶潤洗； 3：放入培養箱消化2-3分鐘，輕拍培養皿側壁，看到細胞脫壁且聚集的細胞團松散開后，加入2mL完全培養基終止消化； 4：將細胞輕柔吹打，使細胞混勻為懸浮液，根據需求進行接種。 小貼士 細胞密度不能太低；潤洗時要注意將所有細胞都浸潤到。 培養注意事項 1：該細胞對外界刺激較為敏感，建議使用新鮮的DMEM高糖培養基，培養基出現發紫現象時不建議繼續使用，且及時更換新鮮培養基； 2：該細胞貼壁不牢，會有部分細胞懸浮。換液時勿用PBS進行沖洗，懸浮細胞過多時可離心收集再放回原培養瓶； 3：該細胞傳代時請注意消化程度，請勿消化過度。
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