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發布時間：2022/11/18 8:57:52 閱讀次數：306
貨號：YX-W-B603
規格：100T/96S
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑10mg×1支，4℃保存；臨用前配置成0.1mg/mL的葡萄糖標準水溶液； 試劑二：粉劑×1瓶， 4℃保存；
微量法
糖原是由葡萄糖單位構成的高分子多糖，是糖的主要的儲存形式之一，主要貯存在肝和肌肉中作為備用能量，分別稱為肝糖原和肌糖原。肝糖原可調節血糖濃度，當血糖升高時可在肝臟合成糖原，血糖降低時，肝糖原則分解為葡萄糖以補充血糖。因此，肝糖原對維持血糖的相對平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的儲存形式,在劇烈運動消耗大量血糖時，肌糖原不能直接分解成血糖，必須先分解產生乳酸,隨血液循環到肝臟,通過糖異生轉變為肝糖原或葡萄糖。
測定原理：蒽酮法。利用強堿性提取液提取糖原，在強酸性條件下利用蒽酮顯色劑測定糖原含量。
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量比色皿/96 孔板、濃硫酸（不允許快遞） 和蒸餾水。
一、糖原提取：
1﹑細胞或細菌：收集500~1000 萬細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；加入0.75mL 提取液超聲波破碎細菌或細胞（功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30 次）；轉移至10mL 試管中， 置于95℃水浴20min（蓋緊，防止水分散失），隔5min 振搖試管1 次，使充分混勻；取出試管冷卻后，用蒸餾水定容到5mL，混勻，8000g 25℃離心10min，取上清液待測。
2﹑組織：稱取0.1~0.2g 樣品，置于10mL試管中；加入0.75mL提取液，置于95℃水浴20min（蓋緊， 防止水分散失），隔5min振搖試管1 次，使充分混勻；待組織全部溶解后，取出試管冷卻后，用蒸餾水定容到5mL，混勻，8000g 25℃離心10min，取上清液待測。
1、分光光度計或酶標儀預熱30min 以上，調節波長至620nm，蒸餾水調零。調節水浴鍋至95℃。
2、在試劑二中倒入6mL 蒸餾水，緩慢倒入24mL 濃硫酸，充分溶解混勻后使用。4℃有效期一周。
3、加樣表（在 EP 管中反應）：
| 試劑 | 空白管（μL） | 標準管（μL） | 測定管（μL） |
| 待測樣本 |
|
| 60 |
| 試劑一 |
| 60 |
|
| 蒸餾水 | 60 |
|
|
| 試劑二 | 240 | 240 | 240 |
混勻，置95℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，取200μL 轉移至微量比色皿或96 孔板中，于620nm 波長處，分別讀取空白管、標準管和測定管吸光度，分別記為A1、A2 和A3。
注意：1、空白管和標準管只要測一次。
2、如果A3-A1 大于2，需要將樣本用蒸餾水稀釋，計算公式中乘以相應的稀釋倍數。三、糖原含量的計算：
1、按照樣本鮮重計算
糖原（mg/g 鮮重）=1.11×(C 標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)
= 0.555×(A3-A1)÷（A2-A1)÷W
2、按照蛋白質含量計算
糖原(mg/mg prot)=1.11×(C 標準×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)
=0.111×(A3-A1) ÷（A2-A1) ÷Cpr
3、按照細菌或細胞數量計算
糖原（mg/104cell）=1.11×(C 標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(細菌或細胞數量×V1÷V2)
= 0.555×(A3-A1)÷（A2-A1)÷細菌或細胞數量
1.11：是此法測得葡萄糖含量換算為糖原含量的常數，即111μg 糖原用蒽酮試劑顯色相當于
100μg 葡萄糖用蒽酮所試劑顯示的顏色；C 標準管：標準管濃度，0.1mg/mL；V1：加入反應體系中待測樣本體積，0.06mL；V2：提取液體積，5mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；細菌或細胞數量：以104為單位，萬個。
注意：最低檢測限為10ng/g 鮮重或0.1ng/mg prot。
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