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如何選擇細胞培養基？

發布時間：2024/1/12 10:38:40 閱讀次數：269

如何選擇細胞培養基？培養基是培養環境中最重要的組成部分，因為它為細胞生長提供了必要的營養、生長因子和激素，并調節培養物的pH值和滲透壓。盡管最初的細胞培養實驗使用從組織提取物和體液中獲得的天然培養基進行，但對標準化和培養基質量的需求不斷增長，促進了化學成分確定的培養基的發展。

培養基的種類培養基的三個基本類別分別是基礎培養基、減血清培養基和無血清培養基，三種培養基對血清添加的要求有所不同。基礎培養基大多數細胞系在含有氨基酸、維生素、無機鹽和碳源（例如葡萄糖）的基礎培養基中生長良好，但在這些基礎培養基的配方中必須進一步添加血清。
減血清培養基減血清培養基是在細胞培養實驗中，減少血清不良影響的另一種策略是使用減血清培養基。減血清培養基是富含營養物質和動物源性因子的基礎培養基配方，可減少所需的血清量。
如何選擇細胞培養基？無血清培養基無血清培養基（SFM）通過用適當的營養和激素配方替代血清，避免了使用動物血清的問題。無血清培養基配方適用于許多原代培養物和細胞系，包括用于生產重組蛋白的中國倉鼠卵巢（CHO）細胞系、各種雜交瘤細胞系、昆蟲細胞系Sf9和Sf21（草地貪夜蛾）以及用作病毒生產宿主的細胞系（例如293、VERO、MDCK、MDBK等）。使用無血清培養基的主要優勢之一是，能夠通過選擇生長因子的適當組合使培養基對特定細胞類型具有選擇性。下表列出了無血清培養基的優點與缺點。
細胞培養基最佳實踐方案下面是細胞培養基實踐方案的一些簡單的提示和技巧，可以幫助您確保細胞培養基保持最佳性能。我們提供各種經典的基礎培養基、減血清培養基和無血清培養基，以及生長因子、添加劑、抗生素和試劑，供您進行細胞培養實驗。 如何選擇細胞培養基？

細胞培養步驟

a、細胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，留5ml完全培養基，放入37℃、5%CO₂孵箱培養；如果細胞密度超80%，即可進行傳代培養，傳代具體步驟如下：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA）至培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上完全培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，使之完全脫落后吸出，然后將懸液轉移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL完全培養基重懸。

4. 將細胞懸液按1：2的比例進行分瓶傳代（兩個T25瓶），補充新的完全培養基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO₂的細胞培養箱中培養。

b、細胞凍存：

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄T25培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；

3、棄上清，沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。

4、將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要將細胞轉入液氮罐中，則需在-80℃冰箱中存放24小時以上再轉入液氮罐中。

C、細胞復蘇：

1、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、棄上清，沉淀用5ml完全培養基重懸，接種至T25培養瓶，放于37℃,5%CO₂細胞培養箱中培養；

4、第二天，換用新鮮完全培養基繼續培養。

注意事項：有些細胞貼壁不牢，在運輸過程中容易發生細胞脫落，這是正常現象。可按此方法：將培養瓶所有培養液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養（后期對比培養），沉淀加入胰酶1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml完全培養基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml完全培養基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的完全培養基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養箱中培養。 如何選擇細胞培養基？