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Elisa標準曲線怎么選擇？

發布時間：2024/3/11 11:00:33 閱讀次數：267

Elisa標準曲線怎么選擇？Elisa實驗選擇什么方程去擬合標準曲線最合適呢？

在s曲線的低濃度部門可以用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部門可以用直線方程，中間部門可用對數方程，而中后段可用四參數。免疫檢測時尺度點(可以是倍比稀釋的，也可以不是)濃度假如和相應的吸光度(od)值假如能夠呈現直線關系當然是最理想的了，這時可以通過excel等利便的獲得擬合曲線，進而推算出樣品的濃度值。
關于尺度曲線的擬合方式，直線、二次曲線、三次曲線、指數、對數等雖都可用于Elisa及其它生物學反應中的曲線擬合，但都只合用于曲線的一部門，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中間一段，而logistic曲線則對曲線的全部都有較好的合用性。在一個長的區間內，logistic應該都能擬合得較為理想。假如用來定量，s形曲線的中間段(較陡處)是比較好的，而兩真個平坦部門計算誤差會大，有時甚至會很大。用于免疫檢測的所謂“尺度曲線"實在稱為擬合曲線比較合適。目前國際上最流行的免疫檢測擬合方式是“四參數邏輯擬合"，用這種擬合方式往往能夠比較精確的反映濃度和吸光度的曲線關系，從而進一步比較準確的獲得樣品中待測物質的濃度值。但我們做免疫檢測很少有時候能夠有這么理想的情況，標品濃度和相應od值往往是"s"型的曲線關系，這時就不能用直線擬合的方式了，而對擬合方法進行選擇就是必要的了。樞紐在于你的尺度曲線做到了s形的哪一部門，你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部門。當然，假如用于定量，仍是在中間一段較好。但建模型是一回事，而用它來定量是另一回事。這些方法固然沒有一種方法可以通用，但也都可以用。但并不是說它就是萬能的。事實上不僅是Elisa，其它良多生物學反應都是s形曲線，也都可以用logistic曲線擬合，主要原因在于不同濃度結合率不是等比的。所以對于S曲線擬合度要求必須達到0.995以上，但對于直線，二次函數，指數要求大于0.95以上，對于雙對數擬合直線必須達到0.99以上，對于間接競爭法，濃度和吸光度呈現反比，相關系數必須達到0.92以上。