ELISA實驗中常見問題及原因分析
（一） ELSIA實驗中結果顏色淺、靈敏度偏低的原因
1. 試劑盒在運輸、保存期間放置的溫度過高，時間過長，造成抗原、抗體效價下降，酶的活力降低。
2. 試劑盒已經超出保存的有效期，抗原抗體效價下降，酶的活性降低。
3. 移液取樣不足，移液時抽吸、排放太快，移液嘴內壁掛液太多或者內壁不清潔。造成加樣量不足。
4. 孵育溫度偏低，或多塊反應板重疊放置造成孔內的實際溫度偏低，使抗原、抗體復合物形成過少。
5. 保溫時間不足，抗原、抗體反應不完全。
6. 顯色劑加入量不足。
7. 顯色液A,B比例不對。
8. 洗滌時沖擊力過大，洗滌液浸泡時間太長，洗滌次數增加，導致已經形成的抗原、抗體復合物洗脫。
9. 底物反應的溫度不夠、時間不足。
（二） ELSIA實驗中結果出現白板、陽性對照不顯示的原因
1. 洗滌液配制有誤。
2. 終止液誤作為濃縮洗滌液或者酶結合物稀釋使用。
3. 漏加酶結合物，誤加酶結合物或者酶標二抗的實驗順序錯誤。
4. 終止液當作緩沖溶液使用。
5. 配制溶液中殘留了滅活酶活力的物質。
6. 底物液未加入OPD或者TMB.
7. 運輸、存儲不當、導致酶活力喪失。
8. 底物液中未加入過氧化氫或放置過久過氧化氫失效。
（三） ELSIA實驗中結果全部顯色的原因
1. 酶結合物的濃度過大。
2. 孵育溫度偏高，底物顯色時間過長。
3. 洗滌不充分，樣品有其他成分殘留或者酶結合物殘留。
4. 底物配制時間過久，底物受光照射時間較長或污染。
5. 整批樣品放置時間過長被污染或生長細菌。
6. 移液嘴重復使用時，未清洗干凈或者消毒不徹底。
7. 配制溶液的水質有問題。
（四） ELSIA實驗中結果陰性、陽性對照顯色差距較小的原因
1. 稀釋不準、加樣量不準。
2. 加樣時各孔均被污染。
3. 底物不新鮮，配制時間過長或被污染。
4. 試劑效價下降或超過了試劑的有效使用期。
5. 配制溶液的水質有問題。
（五） ELSIA實驗結果重復性不好的原因
1. 樣品加入量多少不一，加樣時間又長有短。
2. 樣品加入后未充分混合均勻。
3. 移液加樣器加樣量不一致。
4. 酶標儀濾光片不對。
5. 操作過程中個別反應孔中液體外濺。
6. 不同批號試劑混用。
7. 瓶蓋交叉使用。
8. 孵育條件和保溫時間不一致。
9. 顯色時間和條件不一致
10. 邊緣效益，導致周邊孔（尤其是四個角）較中央孔顯色深。
11. 將酶結合物或底物溶液加在孔壁上，并有殘留。
12. 酶結合物未充分混勻就加入反應孔中。
13. 洗滌條件不一致。
14. 多加或少加了酶標記物、底物。ELISA實驗中常見問題及原因分析
