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發布時間：2024/9/26 8:48:34 閱讀次數：76
用于通過酶免疫測定法定量測定人唾液中的皮質醇。僅供研究使用。不用于診斷程序。
皮質醇ELISA(唾液)（11-CORHU-E01-SLV）檢測原理：
皮質醇唾液ELISA是一種競爭性免疫測定。標準品、對照品和樣品中存在的皮質醇與酶標記的抗原（HRP結合物）在微孔板上的有限數量的抗皮質醇抗體結合位點之間發生競爭。經過洗滌步驟去除未結合的物質后，添加TMB（酶）底物，并與HRP反應形成與存在的皮質醇量成反比的藍色產物。孵育后，通過添加終止液終止酶反應，顏色由藍變黃。在450nm處的微孔板讀取器上測量吸光度。使用一組校準品繪制校準曲線，從而可以直接讀取樣品和對照品中的皮質醇量。
樣品收集和儲存：
避免在吃正餐后1小時內或在飲酒后12小時內收集樣本。酸性或高糖食物可能會通過降低樣品pH值和影響細菌生長來影響測定性能。為了盡量減少這些因素，在收集樣本前10分鐘徹底漱口。不要使用血液污染的樣本。
每份重復測定需要大約1毫升唾液。在收集樣本前10分鐘徹底漱口。在不用力或誘導的情況下，將4-5毫升唾液收集到一個干凈的玻璃管中（可以使用Sarstedt的Salivette）。唾液樣本可以在2-8°C下儲存長達24小時，或者在分析將在以后進行的情況下，儲存在-10°C或更低的溫度下。處理時，將所有人類樣本視為可能的生物危害物質，并采取適當的預防措施。
皮質醇ELISA(唾液)樣品預處理和儲存：
收集后，必須按照以下程序對樣本進行預處理：
1. 將樣本冷凍至少2小時。
2. 解凍樣本。
3. 使用漩渦混合器混合并離心樣本10分鐘，速度為2000x g。
4. 小心地移除上清液，并轉移到一個新的標記管中。上清液將在測試的測定程序中使用。
校準品和試劑盒對照品不需要預處理；它們是以即用格式提供的。
將預處理后的唾液樣本儲存在2-8°C下長達24小時，或者如果分析將在以后進行，則冷凍在-10°C或更低的溫度下。儲存的樣本在使用前應檢查以確保不含沉淀物。如果有沉淀物，按照樣本預處理部分的步驟3-4進行操作。處理時，將所有人類樣本視為可能的生物危害物質。
質量控制：
在評估測試結果的有效性時，應評估以下標準：
1. 最高濃度的校準品達到QC證書中所述的%結合可接受范圍。%結合 = （校準品的OD/校準品A的OD）x 100。
2. 試劑盒對照品獲得的值在QC證書中所述的可接受范圍內。
3. 使用的任何外部對照品的結果符合可接受的范圍。
皮質醇ELISA(唾液)測定程序：
注意：所有將要測試的樣品在使用前必須經過預處理。（參見“樣品預處理和儲存”部分）。校準品和試劑盒對照品不需要預處理，因為它們是即用型的。
所有試劑和樣品在使用前必須達到室溫，并輕輕倒置混合。校準品、對照品和樣品應以雙份進行測定。一旦開始程序，所有步驟都應不間斷地完成。
1. 準備1X工作溶液的HRP結合物和洗滌緩沖液。
2. 從微孔板框架中取出將要使用的微孔條數量，并將其放回帶有干燥劑的袋子中。重新密封袋子，并將任何未使用的條放回冰箱。
3. 將每個校準品、對照品和樣品的50 ?L分別準確移液到預先確定的孔中，并進行雙份測定。
4. 向每個孔中加入100 μL的1X工作HRP結合物溶液。（建議使用多通道移液器。）
5. 在室溫下，使用微孔板振蕩器（軌道振蕩器（直徑3mm）設置為600轉/分鐘或往復振蕩器（行程長度1.5”）設置為每分鐘180次振蕩）孵育45分鐘。
6. 使用自動微孔板洗滌器（首選）或按以下說明手動洗滌微孔板：
自動：使用自動微孔板洗滌器，進行3周期洗滌，每個孔使用300 μL的1X工作洗滌緩沖液（3 x 300 μL）。一個周期包括抽吸所有孔，然后用300 μL的1X工作洗滌緩沖液填充所有孔。在最后一次洗滌周期后，抽吸所有孔，然后用力將微孔板拍在吸水紙上以去除殘留液體。
手動：手動洗滌時，進行3周期洗滌，每個孔使用300 μL的1X工作洗滌緩沖液（3 x 300 μL）。一個周期包括通過將孔的內容迅速排空到廢液容器中來抽吸所有孔，然后使用多通道移液器向每個孔中移液300 μL的1X工作洗滌緩沖液。在最后一次洗滌周期后，通過將內容迅速排空到廢液容器中來抽吸所有孔，然后用力將微孔板拍在吸水紙上以去除殘留液體。
7. 向每個孔中加入150 μL的TMB底物（建議使用多通道移液器）。
8. 在室溫下，使用微孔板振蕩器（軌道振蕩器（直徑3mm）設置為600轉/分鐘或往復振蕩器（行程長度1.5”）設置為每分鐘180次振蕩）孵育15-20分鐘。
9. 向每個孔中加入50 μL的終止液（建議使用多通道移液器），按照添加TMB底物時相同的順序和速度。輕輕拍打微孔板框架以混合孔中的內容。
10. 在添加終止液后20分鐘內，使用設定為450 nm的吸光度微孔板讀取器測量光密度（吸光度）。
典型表格數據：
僅樣本數據。不用于計算結果。
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