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抗-HAV ELISA定性/定量測試分析&結果評估

發布時間：2024/9/26 8:49:43 閱讀次數：72

抗甲型肝炎ELISA是一種檢測甲型肝炎抗體的酶免疫測定法人血清中的病毒。僅供研究使用。不用于診斷程序。

抗-HAV ELISA定性/定量（22-HAVHU-E01）檢測原理：

抗HAV ELISA是一種假性競爭酶免疫測定。血清或血漿樣品被加入到預先涂有滅活HAV抗原的微孔板孔中，并在37°C下孵育2小時。抗-HAV抗體與抗原結合。然后加入結合物（過氧化物酶標記的抗-HAV），并在37°C下再次孵育1小時。抗原的自由結合位點被結合物結合。多余的結合物從板上洗去，加入底物并在室溫下孵育30分鐘。結合的結合物將底物的顏色改變為藍色。通過加入終止液來終止反應。顏色變為黃色。在微孔板讀取器上測量有色反應產物的吸光度。吸光度與抗-HAV滴度成反比。用于定量測定時，請使用所包含的血清標準品來準備滴定曲線。

結果評估：

首先，使用選定的參考波長（>590 nm）確定的吸光度從450 nm的每個吸光度值中減去，無論選擇的評估方法如何。之后，從所有值中減去空白的吸光度（A1/A2）。得到的測量值是所有進一步分析的基礎。

抗-HAV ELISA定性/定量測試分析：

為了在人血清樣品中定性測定抗-HAV抗體，產品開發過程中創建了一種方法，該方法能夠以98.3%（n=801）的靈敏度區分陽性和陰性樣品。為此，根據以下公式從陽性對照和陰性對照的信號計算截止值：

截止值 = （陽性對照的平均吸光度 + 陰性對照的平均吸光度） / 2

平均吸光度值高于截止值的樣品為陰性。

吸光度值低于截止值的樣品為陽性。吸光度在截止值的±10%附近的樣品應重新測定。

表1顯示了一個示例性測試結果。陰性和陽性對照之間的吸光度差異大于0.4（1.390至0.24）。截止值的計算結果如下：

截止值 = (NK + PK) / 2 = (1.390 + 0.024) / 2 = 0.707

因此，截止值是0.707。這樣，所有信號高于這個值的樣品被歸類為陰性（不含抗-HAV抗體），所有信號低于0.707的樣品被評估為陽性（含抗-HAV抗體）。

血清樣品1的吸光度大于截止值，因此它是陰性的。血清樣品2的吸光度小于截止值，因此它是陽性的。血清樣品3的吸光度在0.778 - 0.636（0.707的±10%）范圍內，必須在上述示例中重復測定。

表1：定性抗-HAV測定結果示例。

抗-HAV ELISA定性/定量

測試有效，因為符合以下條件：

陰性對照（NK）和陽性對照（PK）之間的消光差>0.4

半定量測試分析：

抗體滴度計算

除了使用定義的標準計算抗體含量（mIU/mL）外，還可以通過測定抗體滴度進行半定量分析。在這種ELISA中，使用不同稀釋度的未知樣品。根據預期的抗體水平，對樣品進行稀釋。對于這些稀釋，使用包含10%陰性血清（VPN）的稀釋液。為了確定（截止值）的滴度，使用以下公式：

截止值 = （陽性對照的平均吸光度 + 陰性對照的平均吸光度） / 2

吸光度直接低于截止值的血清稀釋度代表抗體滴度。

抗-HAV ELISA定性/定量文獻參考：

1) Flehmig, B.: Hepatitis A. Baillière`s Clinical Gastroenterology, Vol.4 No. 3, p. 707,1990.

2) Ambrosch, F. et al.: Comparison of HAV-Antibodies Induced by Vaccination,Passive Immunization, and Natural Infection. Viral Hepatitis and Liver Disease. S.98 (1990). (Editors: Hollinger, Lemon, Margolis, published by Williams and Wilkins, Baltimore; ISBN 0-683-04120-7).

3) Delem, A. et al.: Characterization of the immune response of volunteers vaccinated with a killed vaccine against hepatitis A. Vaccine, Vol. 11, Issue 4, S.479 (1993).

4) Heinricy, U. et al.: Schedule-dependent Immune Response to Hepatitis A Vaccination. Viral Hepatitis and Liver Disease. S. 108 (1990). (Editors: Hollinger,Lemon, Margolis, published by Williams and Wilkins, Baltimore; ISBN 0-683-04120-7).