當前位置:首頁>技術資訊
發布時間:2024/9/26 8:59:12 閱讀次數:64
α2-巨球蛋白ELISA是一種高靈敏度的雙位點酶聯免疫測定法(ELISA)用于測定大鼠血清和血漿中的α2-巨球蛋白。用于研究僅限使用。不用于診斷程序。
作為ALPCO在中國的區域總代理,強烈推薦ALPCO熱銷產品大鼠α2-巨球蛋白ELISA試劑盒,96孔。產品僅用于科研,不可用于臨床診斷。
產品名稱 | 貨號 | 詳情 |
大鼠α2-巨球蛋白ELISA試劑盒,96孔 | ALP-41-A2MRT-E01 |
大鼠α2-巨球蛋白ELISA試劑盒,96孔檢測原理:
雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定的原理在圖1中表示。在這種測定中,樣品中的α2-巨球蛋白(A2M)與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗A2M抗體發生反應。通過洗滌去除未結合的蛋白質后,加入與辣根過氧化物酶(HRP)結合的抗A2M抗體。這些酶標記的抗體與之前結合的A2M形成復合物。經過另一次洗滌步驟后,通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)來測定結合的酶。結合的酶量與測試樣品中A2M的濃度直接相關;因此,450納米處的吸光度是測試樣品中α2-巨球蛋白濃度的量度。測試樣品中A2M的量可以從標準品構建的標準曲線中插值得到,并根據樣品稀釋進行校正。
程序的局限性:
當完全理解了說明書中的信息,并遵循良好的實驗室操作規范時,將獲得可靠和可重復的結果。可能影響測定性能的因素包括儀器功能、玻璃器皿的清潔度、蒸餾水或去離子水的質量、試劑和樣品移液的準確性、洗滌技術、孵育時間或溫度。不要將試劑與其他批次或來源的試劑混合或替換。
樣品收集和處理:
所有血液成分和生物材料應視為潛在危險。處理和處置時遵循通用預防措施。如果血液樣品出現凝塊、嚴重溶血、脂血,或樣品的完整性受到關注,請做記錄,并謹慎解釋結果。下面列出的樣品收集和儲存條件是一般性指導。尚未評估樣品的穩定性。
? 血清樣品 - 應通過靜脈采血。血凝塊形成后通過離心分離血清。取出血清立即進行測定或分裝并儲存于-80°C(最好)或-20°C。避免反復凍融循環。
? 血漿樣品 - 血液應收集到含有抗凝劑的容器中,然后進行離心。立即進行測定或分裝并儲存于-80°C(最好)或-20°C。避免反復凍融循環。
? 已知干擾物質 - 濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會抑制酶反應。
樣品稀釋:
測定要求每個樣品在使用前進行稀釋。每次進行測定時,所有樣品都應以雙份進行測定。推薦的稀釋比例僅供參考。稀釋應基于未知樣品的預期濃度,使稀釋后的樣品落在標準曲線的動態范圍內。如果不確定樣品水平,在運行整個板之前,強烈建議對一個或兩個代表性樣品進行系列稀釋。
血漿和血清樣品 - 推薦的起始稀釋比例為1:3000。要準備1:3000的樣品稀釋液,將5微升樣品轉移到495微升1倍工作稀釋液中。這得到1:100的稀釋。接下來,將1:100的樣品通過將10微升轉移到290微升1倍工作稀釋液中進行稀釋。這得到樣品的1:3000稀釋。每個階段都要徹底混合。
結果計算
1. 從每個孔的測試值中減去平均背景值(標準零的平均吸光度讀數)。
2. 對每個標準的平均重復讀數進行平均,并使用結果構建標準曲線。通過使用能夠生成四參數邏輯曲線擬合的計算機軟件來減少數據,構建標準曲線。也可以使用二階多項式(二次)或其他曲線擬合;然而,它們對數據的擬合將不夠精確。
3. 從標準曲線中插值得到測試樣品值。校正血清稀釋因子,以得到原始樣品中α2-巨球蛋白的濃度。
附錄A 參考血清信息
本試劑盒中包含一瓶參考血清。
請參閱隨附的產品概況表以獲取特定批次的信息。
請注意以下事項:
1. 收到參考血清后應立即冷凍。如果儲存得當,它在有效期前都是穩定的。
2. 參考血清應適當稀釋,以適應標準曲線范圍。有關說明,請參考協議中的“樣品稀釋”部分。
3. 在移液樣品(程序部分)的同時,也應以雙份移液參考血清。
ALPCO產品種類多樣,可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等,涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域,尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。
掃碼咨詢微信客服
掃碼咨詢微信客服