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發布時間：2024/9/27 8:53:21 閱讀次數：93
大鼠前白蛋白ELISA是一種高靈敏度的雙位點酶聯免疫測定法（ELISA），用于測定大鼠血清和血漿樣本中的前白蛋白。僅供研究使用。不用于診斷程序。
大鼠前白蛋白ELISA（ALP-41-PALRT-E01）檢測原理：
在這種檢測中，樣本中存在的前白蛋白與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗前白蛋白抗體發生反應。通過洗滌去除未結合的蛋白質后，添加與辣根過氧化物酶（HRP）結合的抗前白蛋白抗體。這些酶標記的抗體與之前結合的前白蛋白形成復合物。在另一個洗滌步驟之后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB），對結合的酶進行檢測。結合的酶量與被測試樣本中前白蛋白的濃度直接相關；因此，450納米處的吸光度是測試樣本中前白蛋白濃度的量度。測試樣本中的前白蛋白量可以從標準品構建的標準曲線中插值得出，并根據樣本稀釋進行校正。
樣本收集和處理：
所有血液成分和生物材料應視為潛在危險。在處理和處置時遵循通用預防措施。如果血液樣本出現凝血、嚴重溶血、脂血，或對樣本的完整性有疑慮，請做記錄并謹慎解釋結果。下面列出的樣本收集和儲存條件是作為一般指導。尚未評估樣本的穩定性。
1血清樣本 - 應通過靜脈穿刺收集血液。血液凝固后，應通過離心分離血清。取出血清并立即檢測或分裝樣本并儲存在-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融循環。
2血漿樣本 - 應將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進行離心。立即檢測或分裝樣本并儲存在-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融循環。
3已知干擾物質 - 濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會抑制酶反應。
試劑準備：
在使用前，將所有試劑平衡至室溫（16°C至25°C）。
1稀釋液濃縮液 - 提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）按1:5稀釋。
2洗滌液濃縮液 - 提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）按1:20稀釋。在儲存溫度較低時，濃縮液中出現結晶并不罕見。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。
3酶-抗體結合物 - 為每個微孔板測試條計算所需的工作結合物溶液量，為每個用于測試的測試條添加10微升酶-抗體結合物至990微升1X稀釋液中。均勻但輕柔地混合，避免產生泡沫。
4大鼠前白蛋白ELISA微孔板 - 按提供的狀態準備使用。打開鋁箔袋，從袋中取出微孔板。取出在檢測中不會使用的所有條和孔，放回袋中并重新密封，連同干燥劑一起放回。
5大鼠前白蛋白校準品 - 根據特定批次的分析證明書進行準備。
結果計算：
1. 從所有孔的值中減去平均背景值（標準零的平均吸光度讀數）。
2. 對每個標準的平均重復讀數取平均值，并使用這些結果構建標準曲線。通過使用能夠生成四參數邏輯曲線擬合的計算機軟件來減少數據，構建標準曲線。也可以使用二階多項式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對數據的擬合將不夠精確。
3. 從標準曲線中插值樣本值。根據稀釋因子進行校正，以得出原始樣本中的前白蛋白濃度。
附錄A - 參考血清信息：
此試劑盒中包含一瓶參考血清。請參閱隨附的產品概況表以獲取特定批次的信息。請注意以下幾點：
1. 收到參考血清后應立即冷凍。如果儲存得當，它在有效期前都是穩定的。
2. 應適當稀釋參考血清，以適應標準范圍曲線。有關說明，請參考協議中的“樣本稀釋”部分。
3. 在移液樣本（程序部分）時，也應以雙份移液參考血清。
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