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發布時間：2024/9/27 8:55:40 閱讀次數：99
ALPCO-瘦素（小鼠/大鼠）ELISA是一種酶免疫測定試劑盒，適用于定量測定小鼠和大鼠血清或血漿中的瘦素，用于科學目的。僅供研究使用。不用于診斷程序。
瘦素（小鼠/大鼠）ELISA（ALP-22-LEPMS-E01）檢測原理：
瘦素（小鼠/大鼠）ELISA是一種所謂的夾心法。它利用兩種不同的特異性高親和力多克隆抗體來治療這種蛋白質。樣本中的瘦素與固定化抗體定量結合。在接下來的步驟中，生物素化抗體又與瘦素結合。洗滌后，加入鏈霉抗生物素蛋白-過氧化物酶偶聯物，其對生物素具有高度特異性，并與抗體的生物素結合。隨后，過氧化物酶催化酶反應，導致藍色。藍色的強度取決于樣品的瘦素含量。通過加入終止溶液來終止反應，并通過測量吸收來量化顏色強度。
樣本類型
適用于本檢測的小鼠和大鼠血清以及肝素、EDTA或檸檬酸鹽血漿是合適的樣本類型。必須考慮抗凝劑可能導致的樣本稀釋。
樣本收集
應避免溶血樣本。
所需樣本體積
根據樣本的瘦素值，每個測試的最大樣本體積為50微升。樣本應根據預期值在使用前用稀釋緩沖液（VP）進行稀釋。
樣本穩定性
未稀釋的血清樣本可在-20°C下冷凍保存，不會導致小鼠/大鼠瘦素的損失。盡管經過幾次凍融循環后發現水平不受影響，但應避免反復凍融。稀釋后的樣本最多穩定2小時。
樣本稀釋
通常，1:5至1:20的樣本稀釋是合適的。根據物種、飼養和/或個別實驗條件，這可能會有所不同。如果預期瘦素濃度非常低，可以使用1:2稀釋的樣本（甚至未稀釋的樣本）。然而，如果樣本體積有限且瘦素濃度足夠，可能需要更高倍數的稀釋。
1使用稀釋緩沖液VP進行1:5稀釋。例如，對于一個雙重測定，向PE/PP管中移液200微升稀釋緩沖液VP（推薦使用多步移液管處理大量樣本）；然后加入50微升樣本（稀釋1:5）。混合后，在檢測中使用2 x 100微升的該稀釋液。
2或者，向孔中移液80微升稀釋緩沖液VP并加入20微升樣本（混合均勻）。根據預期的瘦素值，可以使用稀釋緩沖液VP進一步稀釋樣本。
瘦素（小鼠/大鼠）ELISA檢測程序
在進行檢測時，空白對照、A-G標準品、KS對照品以及樣本應盡可能快速地移液（例如，<15分鐘）。為避免由于孵育時間差異導致的扭曲，抗體結合物AK、酶結合物EK以及隨后的底物溶液S應以與樣本相同的順序和時間間隔加入到板中。停止液SL應以與底物溶液相同的順序加入到板中。所有測定（空白對照、A-G標準品、KS對照品和樣本）應以雙份進行。為獲得最佳結果，建議精確移液并嚴格遵守操作規程。
典型標準曲線示例：
以下數據僅供展示，不能替代在檢測時生成的數據。
圖1：標準曲線示例
圖1中顯示的標準曲線示例不能用于計算檢測結果。每次進行檢測時都必須建立標準曲線。
瘦素（小鼠/大鼠）ELISA檢測性能特點：
Leptin Mouse/Rat ELISA 使用兩種高親和力的多克隆抗體，這些抗體能夠識別小鼠瘦素。標準品是由重組小鼠瘦素制備的。對大鼠瘦素的一定程度的交叉反應允許該試劑盒用于測量大鼠瘦素。研究發現，大鼠樣本的稀釋與小鼠樣本一樣呈線性。來自同一生產商的重組小鼠和大鼠瘦素的制備在該試劑盒的定量上進行了比較。基于生產商的名義聲明，大鼠材料的相對效力被發現大約是小鼠材料的25%。使用大鼠樣本工作時，建議用戶對試劑盒的值進行校準。這種ELISA是參照WHO NIBSC小鼠瘦素標準97/626進行校準的（見上文）。與人類瘦素的交叉反應率為0.7%。
瘦素（小鼠/大鼠）ELISA文獻參考：
1. Zhang Y, Proenca R, Maffei M, Barone M, Leopold L, Friedman JM. 1994 Positional cloning of themouse obese gene and its human homologue. Nature. 372:425-432.
2. Halaas JL, Gajiwala KS, Maffei M, et al. 1995 Weight-reducing effects of the plasma protein encodedby the obese gene. Science. 269:543-546.
3. MacDougald OA, Hwang CS, Fan H, Lane MD. 1995 Regulated expression of the obese geneproduct (leptin) in white adipose tissue and 3T3-L1 adipocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 92:9034-9037.
4. Rentsch J, Chiesi M. 1996 Regulation of ob gene mRNA levels in cultured adipocytes. FEBS Lett.379:55-59
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