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超靈敏胰島素ELISA，高精度定量測(cè)定人血清和血漿中的胰島素

發(fā)布時(shí)間：2024/9/27 8:57:42 閱讀次數(shù)：94

超敏胰島素ELISA用于定量測(cè)定人血清和血漿中的胰島素。

超靈敏胰島素ELISA（ALP-80-INSHUU-E01.1）檢測(cè)原理：

超敏胰島素ELISA是一種夾心型免疫分析法。96孔微孔板被涂覆有特異性針對(duì)胰島素的單克隆抗體。標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和對(duì)照品與檢測(cè)抗體一起加入微孔板孔中。然后，微孔板在室溫下放置在微孔板振蕩器上，以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度振蕩。第一次孵育完成后，孔被洗滌緩沖液清洗并吸干。加入TMB底物，然后微孔板再次在室溫下以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度振蕩。第二次孵育完成后，加入停止液，并通過(guò)分光光度計(jì)在450納米處測(cè)量光密度（OD）。生成的顏色強(qiáng)度與樣本中胰島素的含量成正比。

注意事項(xiàng)

1. 本試劑盒中包含的人血制品已檢測(cè)是否含有HIV（人類(lèi)免疫缺陷病毒）、HBV（乙型肝炎病毒）和HCV（丙型肝炎病毒）。這些病毒的檢測(cè)方法不能保證病毒的絕對(duì)不存在；因此，所有試劑應(yīng)被視為潛在傳染性物質(zhì)。處理和處置應(yīng)符合所有適當(dāng)?shù)膰?guó)家和地方法規(guī)，以處理潛在的生物危害物質(zhì)。

2. 所有來(lái)自動(dòng)物源的材料均為BSE（瘋牛病）陰性。然而，所有材料應(yīng)被視為潛在傳染性物質(zhì)。

3. 避免直接接觸皮膚。

4. 本產(chǎn)品不得內(nèi)服。

5. 使用本產(chǎn)品時(shí)，避免進(jìn)食、飲水或吸煙。

6. 不要使用口吸移液管吸取任何試劑。

7. 試劑盒中的試劑是特定批次的，不得替換。

8. 不要使用超過(guò)有效期的試劑。

9. 不建議更改測(cè)試程序，可能會(huì)影響測(cè)試結(jié)果。

試劑準(zhǔn)備

所有試劑在使用前必須平衡至室溫。洗滌緩沖液濃縮液需用20份蒸餾水稀釋。例如，要準(zhǔn)備工作強(qiáng)度洗滌緩沖液，用400毫升去離子水稀釋20毫升洗滌緩沖液濃縮液（21倍）。工作強(qiáng)度洗滌緩沖液在室溫（18-25°C）下穩(wěn)定4周。

糖尿病控制（1級(jí)）以?xún)龈尚问教峁Ｕ?qǐng)參考每個(gè)試劑盒附帶的分析證明，以獲取重懸的適當(dāng)體積的去離子水。用橡膠塞和瓶蓋封閉小瓶，輕輕搖晃小瓶，并在使用前讓其靜置30分鐘。小瓶中的內(nèi)容物應(yīng)完全溶解，無(wú)可見(jiàn)顆粒。重懸的對(duì)照品在2-8°C下儲(chǔ)存1天是穩(wěn)定的。如果需要，對(duì)照品可以分裝后在-20°C下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月。對(duì)照品不應(yīng)反復(fù)凍融。

超靈敏胰島素ELISA結(jié)果計(jì)算

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。零標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)作為空白，其平均值應(yīng)從每個(gè)孔中減去。建議使用軟件程序來(lái)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線并確定樣本的濃度。超敏胰島素ELISA是一種配體結(jié)合測(cè)定，其響應(yīng)與分析物濃度呈S形關(guān)系。目前接受的此類(lèi)曲線的參考模型使用4或5參數(shù)邏輯（pl）擬合，因?yàn)檫@些模型在更大范圍內(nèi)優(yōu)化了準(zhǔn)確性和精確性。盡管三次樣條和其他模型是可接受的方法，但它們通常在范圍的低端和高端顯示出較低的內(nèi)部檢測(cè)準(zhǔn)確性和精確性。

在以下示例中，使用了5參數(shù)邏輯曲線擬合來(lái)最大化低濃度樣本的準(zhǔn)確性和精確性。然而，由于個(gè)別實(shí)驗(yàn)室條件的影響，所有模型在可檢測(cè)范圍的最低端和最高端的準(zhǔn)確性和精確性都是有限的。因此，在解釋分析物響應(yīng)變得非線性的結(jié)果時(shí)，應(yīng)始終謹(jǐn)慎。

典型標(biāo)準(zhǔn)曲線：

以下結(jié)果僅用于演示目的，不能代替測(cè)定獲得的數(shù)據(jù)。每次分析運(yùn)行和平板測(cè)試都必須繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

典型標(biāo)準(zhǔn)曲線