發布時間：2024/10/15 9:06:08 閱讀次數：50
【產品名稱】
通用名：雞禽流感病毒IgG抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Avian Influenza Virus (ELISA)
【包裝規格】 96T/盒
ELISA【預期用途】 禽流感（Avian influenza，AI）是目前危害國內養禽業的一種急性接觸性病毒性傳染病。疫苗免疫是預防和控制禽流感發生的最有效途徑，而免疫后抗體水平的高低反映實際的疫苗免疫效果，直接關系到免疫雞群對禽流感病毒的抵抗力。
本試劑盒適用于不同品種、不同日齡雞的血清中禽流感病毒特異性抗體的檢測。可用于禽流感（全病毒）疫苗免疫效果評價、免疫時間的確定分析、地區雞群禽流感免疫狀況評價等。
【原 理】
本試劑盒系由預包被禽流感病毒（AIV）重組抗原的微孔板和酶標記二抗及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中禽流感病毒特異性抗體。實驗時，在包被板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經溫育后，若樣品中含有禽流感病毒的特異性抗體，則將與包被板上抗原結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后；再加入酶標二抗，與包被板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶結合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有特異性抗體。
【儲存及有效期】
于2～8℃避光保存，有效期為12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，使用期限為1個月。
【試劑盒組成】
| 1. | 禽流感病毒抗原預包被微孔板條 | 96T×1 |
| 2. | 酶標記物 (紅蓋) | 11ml×1 |
| 3. | 樣品稀釋液 (黃蓋) | 50ml×1 |
| 4. | 20X濃縮洗滌液 (透明蓋) | 40ml×1 |
| 5. | 底物液A (白蓋) | 7ml×1 |
| 6. | 底物液B (黑蓋) | 7ml×1 |
| 7. | 終止液 (黃蓋) | 7ml×1 |
| 8. | 陽性對照 (紅蓋，已滅活) | 0.5 ml×1 |
| 9. | 陰性對照 (綠蓋，已滅活) | 0.5 ml×1 |
| 10. | 蓋板膜 | 1張 |
| 11. | 自封袋 | 1個 |
| 12. | 說明書 | 1份 |
【樣品制備】 取動物全血，按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品短期可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
【樣品稀釋】 用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋（如5μl血清加入495μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。
【洗滌液配制】濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫（25℃左右），并搖動使沉淀的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【試驗操作方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量微孔板條，設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰性/陽性對照孔分別加入陰性/陽性對照血清100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣品100μl。
4.混勻，置37℃反應30分鐘。
5.扣去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。
6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調零，于450nm(630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A450）。
【結果判定】
1.陰性對照：正常情況下，陰性對照孔A值≤0.10；
2.陽性對照：正常情況下，陽性對照孔A值≥0.6；
3.臨界值（C.O）的計算：C.O=0.13+陰性對照孔均值（陰性對照孔均值低于0.07時以0.07計算）；
4.結果判定：樣品A值≥C.O為陽性；樣品A值＜C.O為陰性。
ELISA試劑盒【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測雞血清或血漿中禽流感病毒IgG抗體，根據A值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.微孔板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
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