親愛的科研工作者，感謝您信任雅吉生物，我們致力于為大家分享質優價適的質粒，受 各種因素影響，我們只保證質粒的關鍵序列測序正確，不能保證實驗效果。請您收到質粒后
請務必先轉化，再挑取單菌落擴增，不要直接使用。如果您需要即用的大包裝質粒或病毒顆
粒，可委托我們制備，性價比更高。
一、擴增流程
收到產品后，請先根據產品管壁標簽來判斷產品形式，并在擴增前準確查找該質粒菌株的
抗性、感受態和培養溫度。
1、質粒干粉（常溫運輸，存于-20 度，90 天保質期，請務必轉化挑單克隆培養，不要直
接使用和測序）
①收到質粒干粉后請先 5000rpm 離心 1min，再加入 20μl ddH2O 去離子水溶解質粒；
②取 1 支 100μl 感受態于冰上解凍 10min，加入 2μl 質粒，再冰浴 30min 后，42℃熱激
60s，不要攪動，再冰浴 2min；（從第二步開始均要在超凈工作臺中無菌操作）
③加入 900μl 無抗的 LB 液體培養基，180rpm 震蕩 37℃培養 45min；
④6000rpm 離心 5min，僅留 100μl 上清液重懸細菌沉淀，并涂布至目標質粒抗性的 LB
平板上；（可使用本平臺的平板涂布專用玻璃珠進行涂布，可以比傳統涂布方法獲得更多轉化
子）
⑤將平板正向培養 1h，再倒置 37℃培養 14h。如果要求是 30 度則培養 20h；
（菌落過多則將質粒稀釋后再轉化。沒有菌落則加入 10μl 質粒轉化。另不要直接轉表
達感受態，要先轉克隆感受態，重提質粒后再導入表達感受態）
⑥挑取單菌落至 LB 液體培養基中，加入對應抗生素，220rpm 震蕩培養 14h，根據實驗需
要和質粒提取試劑盒說明書提取質粒。
2、甘油菌種（冰袋運輸，存于-80℃，保質期 90 天，請務必劃線挑單克隆培養）
四區劃線后挑單菌落培養，酵母菌需要先液體復蘇再四區劃線，再挑單菌落液體培養。
3、穿刺菌種（冰袋運輸，存于 4℃，保質期 7 天）
穿刺接種，液體培養后四區劃線，再挑單菌落液體培養。
4、菌落平板（冰袋運輸，存于 4℃，保質期 7 天）
直接挑取單菌落至液體培養基中。
5、液體質粒（冰袋運輸，存于-20℃，保質期 90 天）
單獨提取的液體質粒收到后可直接使用。
6、濾紙質粒（常溫運輸，存于-20 度，90 天保質期，請務必轉化挑單克隆培養，不要直
接使用和測序）
收到貨后將濾紙畫圈部分剪下放入 EP 管中，加 100ul 無菌水將濾紙浸濕并浸泡 5min，吸
取 5ul 質粒轉化，離心全涂
