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發布時間：2024/10/22 8:54:54 閱讀次數：36
ATCC官網HT2 Clone A5E小鼠輔助T細胞
一、細胞培養條件
二、細胞收到后處理
培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，消毒后放到超凈臺內嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。（傳代后建議一瓶用原瓶的完全培養基，另外一瓶用自己配的完全培養基，以便進行對比培養，換液后擰松瓶蓋）
三、細胞培養步驟
細胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，留5ml完全培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；如果細胞密度超80%，即可進行傳代培養，傳代具體步驟如下細胞傳代：
a、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。
b、細胞凍存：
1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，將T25 培養瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm
離心5min；
2、棄上清，沉淀細胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液（C7001），混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液即可）
3、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液氮罐中，需在-80℃冰箱存
放 24 小時以上。
C、細胞復蘇：
1、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、棄上清，沉淀用5ml完全培養基重懸，接種至T25培養瓶，放于37℃,5%CO2細胞培養箱中培養；
4、第二天，換用新鮮完全培養基繼續培養。
四、注意事項：該細胞難養，收到細胞可按以下方法操作：
半換液處理，豎著培養瓶在培養箱靜置1小時左右，輕輕吸掉3ml左右培養基，然后補給3ml的完全培養基，如果培養基變色慢，可直接加500ul左右FBS，傳代的時候可以直接補給5ml培養基，分兩個培養瓶培養，一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次，去掉死細胞
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五、售后服務告知書
1）細胞出現問題，可重發的情況有哪些？判定標準是什么？
1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發；
2. 細胞污染問題，請在收到產品48小時內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發；
3. 常溫發貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態照片），重發；
4. 干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現污染，重發；
5. 細胞活性問題，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發；
6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產品合格。4-7天內出現問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協商處理或者按合同價的50%收費重發。
二）細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？
1. 客戶造成細胞污染，不重發；
2. 客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；
3. 非本庫推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發；
4. 細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；
5. 細胞培養時經其它處理的，不重發；
6. 細胞收到2天內，未告知，不重發；
7. 視具體情況而定。
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