為了得到更好的實驗結果,一些ELISA試劑盒實驗新手們還需多加了解技術內容,公司每周都會為您精心整理出重點技術要領,能夠熟練的掌握好這些之后再應用到實驗里面就會簡單的多.今天的主要內容是入了ELISA的門,這些技術點你得知道.
樣本加樣方法
1 細胞上清：前處理必須是細胞離心去除,每孔直接加100μl即可.如果濃度太高需稀釋時,用標準品稀釋液直接稀釋.
2 腦脊液：前處理必須是細胞離心去除,每孔直接加100μl即可.如果濃度太高需稀釋時,用標準品稀釋液直接稀釋.
3 血清血漿：請加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標本,如稀釋量大,請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入,不足部分用標準品稀釋液補充至100ul.
A.血清標本應是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液；
B.血漿標本,推薦用EDTA的方法收集若待測樣本不能及時檢測,標本收集后請分裝,凍存于－20℃,避免反復凍融.
C.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑；
D.標本應清澈透明,檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除.
E.請勿使用溶血,高血脂或污染的標本檢測,否則結果將不準確.
4 組織勻漿液的樣本,要制備過程中需要在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑,防止蛋白成份被內源性蛋白酶降解,造成檢測結果的值偏低.
因組織勻漿液的樣本蛋白種類多,含量豐富,實驗參照血清血漿標本的處理方法進行,否則就會影響實驗結果.具體是加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標本,需稀釋時,請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入,不足部分用標準品稀釋液補充至100ul.
因為目標蛋白不同,可能造成降解的蛋白類型可能不一樣,如果實驗前通過文獻確定用哪種蛋白酶抑制劑,有針對性加入,可節省抑制劑.如果查不到相關文獻,可采用組合抑制的辦法確保蛋白不易被降解.
