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全新推出熱啟動Bst4.2系列——LAMP擴增檢測進入新的高度！

發布時間：2023/3/17 9:35:21 閱讀次數：412

基于自身分子酶進化技術平臺（In silico Design & in vitro Evolution Workflow）,并持續聚焦LAMP恒溫擴增技術,全新升級的Bst4.2系列,將LAMP擴增技術推入了新的高度.熱啟動Bst4.2系列在保持Bst4.0 通擴的能力的基礎上,全系包含熱啟動Aptamer,該配體確保酶在<30℃時,酶活封閉效率>95%,在>60℃時1min內酶活完全釋放.現階段,熱啟動HotStart Bst4.2 Polymerase為已知的LAMP擴增最佳用酶,與普通LAMP擴增體系相比它有絕對的優勢.

	反應溫度提升至70℃,引物配對更加嚴謹,粗樣本的核酸釋放更加充分.
	四引物擴增體系性能和速度堪比六引物體系,使得引物篩選難度降低.
	Helicaser的加入使得反應無需F3/B3引物,FIP/BIP引物濃度也可進一步降低.
	高親和力的Aptamer使得反應體系易于建立,并維持均一的擴增性能.
	基于Bst4.2的HNB變色反應顏色對比更加明顯,且保留了其對樣品和緩沖液的高耐受性.
	建立了基于鏈置換的Probe-LAMP方法,只需改造一條環引物.

實例性能展示

1 Bst 4.2熱啟動性能展示
采用熒光酶活測定法在30℃和60℃條件下測定HotStart Bst 4.2,結果顯示與未加入Aptamer的對照比較來看.HotStart Bst 4.2在30℃條件下酶活幾乎無活性,而60℃條件下1min內酶活完全釋放,恢復100%活性.

2 以Bst 4.2 SYBR Green試劑進行標準LAMP和eLAMP擴增比較
以human Total RNA為模板,采用RnaseP LAMP Primer進行標準LAMP和eLAMP 擴增.在25ul擴增體系中加入10ng 1ng和0ng的RNA,70℃反應40min.從擴增結果可獲得,在Helicaser的加持下F3/B3可完全去除,對擴增速度幾乎無影響,并且非特異性擴增得到改善. 6 Primer LAMP引物濃度：FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM; F3/B3=0.1 μM. 4 Primer eLAMP引物濃度：FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM.

3 以Bst 4.2 Basic試劑進行DP-eLAMP探針法擴增
在眾多的探針法LAMP測試中,DP-LAMP探針法（Displaceable Probe LAMP）為推薦的使用方法（參考PMID: 33626039）.在LAMP擴增中將LF或LB引物退火至互補的猝滅oligo,利用鏈置換活性獲得游離的熒光信號（可參考3831-21說明書資料）.該方案可進一步降低LAMP的非特異擴增.下圖為DP-eLAMP進行三種熒光標記探針的實驗數據.結果顯示HotStart Bst4.2總能獲得高特異性和高重復性的擴增.

4 以Bst4.2 L-HNB 試劑進行L-HNB （紫羅蘭-淡綠）變色反應（肉眼觀察）
以2019-nCoV體外轉錄RNA為模板,采用eLAMP擴增法（FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM）, 對10000 1000 100 25copies/管的陽性RNA進行檢測,ddH20為陰性對照（4重復）.下圖為70℃反應30min 后的檢測結果.結果表明L-HNB法獲得清晰易于區分的顏色變化,極易區分陽性和陰性擴增.

5 以Bst4.2 L-HNB （紫羅蘭-淡綠）變色反應對反應緩沖鹽Tris的耐受性測試
以2019-nCoV體外轉錄RNA為模板,采用eLAMP擴增法（FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM）, 對1000copies/管的陽性RNA進行檢測（2重復）,ddH20為陰性對照（2重復）.下圖為70℃反應30min 后的檢測結果.結果表明L-HNB法,在1x濃度下可耐受10mM Tris-HCl的緩沖鹽,陽性樣本仍然可以充分的變色.該變色方法不受樣本中緩沖鹽影響.