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發(fā)布時(shí)間：2023/4/24 10:34:26 閱讀次數(shù)：336
人萊姆病抗體IgM（Lyme-IgM）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用.
96T
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定人血清 血漿及相關(guān)液體樣本中萊姆病抗體IgM（Lyme-IgM）表達(dá).
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中人萊姆病抗體IgM（Lyme-IgM）表達(dá).用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中萊姆病抗體IgM（Lyme-IgM）相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色.TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色.用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中人萊姆病抗體IgM（Lyme-IgM）的存在與否.
試劑盒組成
| 1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陽性對(duì)照 | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 9 | 陰性對(duì)照 | 0.5ml×1瓶 |
| 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
| 5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
| 6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個(gè) |
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn).若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性.
操作步驟
1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔 陽性對(duì)照2孔 空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰 陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照 陽性對(duì)照50μl.然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl.加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘.
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干.
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外.
7. 溫育：操作同3.
8. 洗滌：操作同5.
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）.
11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）. 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行.
計(jì)算和結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.20
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為萊姆病抗體IgM（Lyme-IgM）陰性
陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為萊姆病抗體IgM（Lyme-IgM）陽性.
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用.
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存.
3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果.
4． 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.
5．底物請(qǐng)避光保存.
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為630nm
7．所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理.終止液為2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全.
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃.
2．有效期：6個(gè)月
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