發(fā)布時間：2023/4/24 10:38:55 閱讀次數(shù)：469
試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫(yī)學診斷
人冠狀病毒抗體（Coronaviruses-Ab）
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）.往預先包被人冠狀病毒抗原的包被微孔中,依次加入標本 HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌.用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色.用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值）,與CUT OFF值相比較,從而判定標本中冠狀病毒抗體（Coronaviruses-Ab）的存在與否.
樣品收集 處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離.
2. 血漿：EDTA 檸檬酸鹽或肝素抗凝.3000轉離心30分鐘取上清.
3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物.
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎.3000轉離心10分鐘取上清.
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍.
自備物品
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL 2-20uL 20-200uL 200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘.從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用.
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封（低溫干燥）保存.
3. 預處理后的樣本無需稀釋,直接取50μL加樣即可.
4. 嚴格按照說明書中標明的時間 加液量及順序進行溫育操作.
5. 所有液體組分使用前充分搖勻.
試劑盒組成
| 名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
| 微孔酶標板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無 |
| 陰性對照 | 0.5mL | 0.5mL | 無 |
| 陽性對照 | 0.5mL | 0.5mL | 無 |
| 樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 檢測抗原-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
| 20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 無 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 無 |
| 終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
| 說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
| 自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水.
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次.
2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次.
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃.
2. 設置陰 陽性對照孔和樣本孔,陰 陽性對照孔中加入陰性對照 陽性對照各50μL；
3. 待測樣本孔加待測樣本10μL,樣本稀釋液40μL；
4. 隨后陰 陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min.
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）.
6. 每孔加入底物A B各50μL,37℃避光孵育15min.
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值.
結果判斷
1. 試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；
陰性對照孔OD值平均值≤0.15.
2. 臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
3. 陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off）,樣品為陰性
4. 陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off）,樣品為陽性
試劑盒性能
1. 準確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.15,說明試驗結果有效.
2. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應.
3. 重復性：板內(nèi) 板間變異系數(shù)均小于15%.
4. 貯藏：2-8℃,避光防潮保存.
5. 有效期：6個月
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責.
2. 嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔.
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