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發布時間：2023/4/26 9:48:45 閱讀次數：333
人細粒棘球絳蟲抗原(Eg Ag)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用.
96T
使用目的：
本試劑盒用于測定人糞便及組織樣本中細粒棘球絳蟲抗原(Eg Ag)表達.
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人細粒棘球絳蟲抗原(Eg Ag)表達.用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中細粒棘球絳蟲抗原(Eg Ag)相結合,經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色.TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色.用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,與CUTOFF值相比較,從而判定標本中人細粒棘球絳蟲抗原(Eg Ag)的存在與否.
試劑盒組成
| 1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1瓶 |
| 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
| 5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
| 6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗.若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性.
操作步驟
1. 編號：將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔 陽性對照2孔 空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰 陽性對照孔中加入陰性對照 陽性對照50μl.然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl.加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘.
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干.
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外.
7. 溫育：操作同3.
8. 洗滌：操作同5.
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,終止反應（此時藍色立轉黃色）.
11. 測定：以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）. 測定應在加終止液后15分鐘以內進行.
計算和結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為人細粒棘球絳蟲抗原(Eg Ag)陰性
陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為人細粒棘球絳蟲抗原(Eg Ag)陽性.
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用.
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存.
3．濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果.
4． 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.
5．底物請避光保存.
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7．所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理.終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全.
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃.
2．有效期：6個月
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