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容易長泡泡的巨噬細(xì)胞——Raw264.7

發(fā)布時(shí)間：2023/5/29 8:56:08 閱讀次數(shù)：818

容易長泡泡的巨噬細(xì)胞——Raw264.7- 在培養(yǎng)過程中你是否遇到過細(xì)胞突然長出“小角”？這個(gè)到底是什么？

- 其實(shí)這個(gè)“小角”俗稱細(xì)胞的“偽足”是細(xì)胞分化導(dǎo)致的,雖然不影響細(xì)胞生長,但會影響到后期實(shí)驗(yàn)效果.那該如何避免它的發(fā)生,我們一起來研究一下.

培養(yǎng)條件：DMEM（高糖）+10%FBS+1%P/S

首先觀察下分化和不分化的生長形態(tài)是怎樣的？

Raw264.7（未分化前）圖1

RAW264.7（分化后）圖2 僅供參考

圖1 為細(xì)胞正常形態(tài)呈不規(guī)則圓形,貼壁生長,未見觸角

圖2 可以清晰看見細(xì)胞長出長長的角,可見細(xì)胞已經(jīng)分化

容易長泡泡的巨噬細(xì)胞——Raw264.7如何收起他的小脾氣？

培養(yǎng)注意事項(xiàng)

｜該細(xì)胞傳代時(shí)不需要用胰酶消化,長時(shí)間的胰酶消化會使細(xì)胞分化,長出偽足,小脾氣就冒出來啦！

｜傳代時(shí)使用無菌細(xì)胞刮刀刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落,收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中.

｜傳代比例,盡量使細(xì)胞密度高于30%.

｜需使用較好的血清來進(jìn)行培養(yǎng).

正確的傳代步驟

｜用無菌細(xì)胞刮刀刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落

｜將刮下來的細(xì)胞用15ml離心管離心收集

｜1000rpm 離心5分鐘

｜去上清,用新鮮的完全培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸

｜按比例接種到新的培養(yǎng)器皿中

小知識

RAW 264.7細(xì)胞系的起源

加利福尼亞索爾克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）誘發(fā)腫瘤的腹水中建立了RAW 264細(xì)胞系.他發(fā)現(xiàn)RAW 264可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖,并且能通過抗體依賴途徑分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞.RAW 264.7不分泌A-MuLV（但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清檢測到病毒）,對LPS非常敏感.該研究1978年發(fā)表在《CELL》雜志. 容易長泡泡的巨噬細(xì)胞——Raw264.7