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人轉移胰腺腺癌細胞吉西他濱耐藥株（ASPC-1/GEM）

發布時間：2024/7/1 9:44:15 閱讀次數：212

人轉移胰腺腺癌細胞吉西他濱耐藥株（ASPC-1/GEM）

細胞介紹

一個胰腺癌病人的腹水中的細胞移植到裸鼠后建立了這個細胞株.

細胞特性

1）來源：ASPC-1耐藥篩選

2） 形態：上皮細胞樣,貼壁生長

3） 含量：>1×10⁶細胞數

4） 用途：僅供科研使用

細胞運輸保存及注意事項

	復蘇細胞	凍存細胞
包裝	充液的T25細胞培養瓶	1mL凍存管
運輸條件	常溫	干冰
保存方式	75%酒精消毒瓶壁,置于37℃恒溫細胞培養箱	-80℃冰箱中保存過夜后轉入液氮/立即復蘇
注意事項	1. 收到細胞請先就培養瓶/凍存管的外觀細胞的狀態,進行拍照并保存,如有問題請及時聯系我們； 2. 收到的復蘇細胞,若有較多細胞飄起,可能由于運輸導致.請先置于37℃細胞培養箱中靜置2~4h,待細胞貼壁后再做處理； 3. 復蘇細胞充液培養基為不含藥物的維持培養基,收到細胞后請及時更換為完全培養基； 4. 建議收到細胞后,首先進行擴增,并凍存部分細胞以備用.

細胞耐藥誘導過程

待細胞生長穩定后,開始倍增藥物誘導劑量,每個劑量保持至細胞可以穩定生長至匯合度達50%以上.遞增藥物濃度依次為：0.03μg/mL 0.3μg/mL 1.5μg/mL 3μg/mL 6μg/mL 12μg/mL 18μg/mL.約10個月后,細胞可在18μg/mL GEM藥物濃度下穩定生長,視為耐藥細胞株構建成功,并命名為ASPC-1/GEM.

細胞培養試劑的配制

1）GEM藥物的配制及保存

建議將GEM藥物配制成18mg/mL的母液：即使用1mL DMSO溶液溶解18mg GEM藥物,使其完全溶解.

注意：可根據用量配置藥物,并將藥物分裝保存,避免反復凍融導致藥物失效.溶解后的GEM,4℃保存1周,-20℃保存1個月,-80℃保存6個月.

2）凍存液的配制

90%優質胎牛血清+10%DMSO,現用現配.

3）完全培養基的配制（推薦使用h005-001b）

成分	體積/濃度
優質胎牛血清	10%
雙抗	1%
GlutaMAX-1谷氨酰胺	1%
GEM	0~18μg/mL
DMEM培養基	補充至所需體積

細胞培養條件

氣相：空氣,95%；二氧化碳,5%；溫度：37℃,培養箱濕度為70%~80%.

細胞處理

1）凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4~6mL完全培養基的離心管中混合均勻,1000rpm/min離心3~5min,棄去上清液.加入1mL完全培養基重懸細胞后,均勻鋪于含6~8mL完全培養基的培養瓶（或皿）中,置于37℃恒溫細胞培養箱中過夜培養.第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況,2~3day換液.

注意：①細胞復蘇過程中,不可使用含有藥物的培養基.須在細胞完全貼壁,形態完全展開,生長狀態穩定后,方可根據實驗需要添加GEM藥物.若加藥后細胞生長狀態較為緩慢,可適當降低GEM的濃度,或使用不含GEM的完全培養基培養至細胞生長狀態較好時,再更換為所需的GEM濃度；

②建議復蘇細胞時始終穿戴防護手套和面罩,避免凍存管因溫差較大而發生爆炸,造成人員傷害.

2）細胞傳代（建議以同等底面積的培養瓶/皿按照1：2比例傳代）

①待細胞密度達到80%~90%時,即可進行傳代培養.

②棄去培養上清,用不含鈣鎂離子的PBS潤洗細胞1次,吸凈殘余的PBS.

③加入適當體積的0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶-1mL,其它培養器皿可覆蓋培養底面即可）,置于37℃培養箱中消化2~5min,顯微鏡下觀察細胞細胞大部分變圓并脫落,即可輕拍培養瓶使細胞全部脫落.迅速拿回操作臺,加入2倍體積的含10%FBS的培養基中止消化.