人多能干細胞培養液,即 Human Pluripotent Stem Cell Medium,也稱人胚胎干細胞培養液( Human Embryonic Stem Cell Medium),是一種配方獨特 化學成分明確 專用于無飼養層培養體系下的人類誘導多能干細胞(Induced pluripotent stem cells, iPSCs)或人類胚胎干細胞(Human embryonic stem cell)的無血清培養液.
本產品可避免使用成分不明確的動物細胞外基質提取物Matrigel Geltrex或的Matrix-Gel™基質膠(C0371/C0372/C0376/C0383/C0387/C0392/C0396).
本產品和Human Vitronectin (C0318/C0319)聯合使用有非常好的培養效果,可大幅降低培養成本.
圖1.在使用Human Vitronectin包被的條件下,人多能干細胞培養液對于人胚胎干細胞和人誘導多能干細胞的培養效果圖.本產品培養的hES和hiPSCs均能在Day2形成邊緣清晰 銳利的克隆,在Day3克隆直徑增大到1mm左右,呈現內部細胞排列緊實(Compact) 表面平滑的胚胎干細胞克隆或誘導多能干細胞克隆形態.Day3后細胞增殖的減緩,同時會伴隨正常的小部分細胞凋亡.上述形態學特征和增殖速率的動態變化與文獻描述基本一致[3].根據圖中檢測結果,與國外知名品牌Competitor G的同類產品相比,本產品實測對上述三種人胚胎干細胞或人誘導多能干細胞的培養效果均顯著優于國外同類品牌產品.實際檢測效果會因實驗條件等的不同而存在差異,本圖僅供參考.
本產品在使用基質膠,例如基質膠的情況下,同樣能取得非常理想的培養效果.本產品在使用時培養的人胚胎干細胞和人誘導多能干細胞的克隆形態如圖2所示.
圖2.在基質膠包被條件下,人多能干細胞培養液(對于人胚胎干細胞和人誘導多能干細胞的培養效果圖.如圖所示,本產品培養的hES和hiPSCs均能在Day2形成邊緣清晰 銳利的克隆,在Day3克隆直徑增大到1mm左右,呈現內部細胞排列緊實(Compact) 表面平滑的胚胎干細胞克隆或誘導多能干細胞克隆形態.Day3后細胞增殖的減緩,同時會伴隨正常的小部分細胞凋亡.上述形態學特征和增殖速率的動態變化與文獻描述基本一致[3].根據圖中檢測結果,與國外知名品牌Competitor G和國內某品牌Competitor S同類產品相比,本產品實測對上述人胚胎干細胞或人誘導多能干細胞的培養效果相近或更優.實際檢測效果會因實驗條件等的不同而存在差異,本圖僅供參考.
人胚胎干細胞(hES H9）在使用 Human Vitronectin包被的情況下,在短期培養(連續傳代20次以內)時對多能干細胞未分化狀態的維持效果如圖3所示.圖中可見,在該培養條件下,培養5代時多能干細胞蛋白標志物SOX2 TRA-1-81和OCT4免疫熒光檢測和堿性磷酸酶染色都呈現強陽性；而干細胞分化標志物SSEA1免疫熒光檢測陰性.連續傳代到10和20次后,干細胞未分化特征性基因OCT4在P5,P10和P20不同代次中均穩定維持較高的水平.同樣,反應干細胞已經分化的特征性基因SOX17,hT(Brachyury)和SOX1的mRNA水平維持極低水平,且在這些代次間無顯著差異,提示細胞處于未分化狀態.
圖3.使用人多能干細胞培養液(C0800)并使用的 Human Vitronectin (C0318/C0319)包被的情況下能很好維持人胚胎干細胞(hES H9)的未分化狀態.圖A,使用多能干細胞免疫熒光檢測試劑盒(C3266, C3279, C32613, C3272)分別檢測連續傳代五次后的多能干細胞,結果顯示干細胞多能性蛋白標志物SOX2 TRA-1-81和OCT4呈現正常的強陽性,而分化標志物SSEA1則未檢測到表達.圖B,使用多能干細胞堿性磷酸酶顯色試劑盒(C3250)檢測顯示高水平的堿性磷酸酶活性,提示為未分化狀態.圖C,qRT-PCR分析顯示多能干細胞未分化特征基因OCT4,以及內胚層(SOX17) 中胚層(hT(Brachyury))和外胚層(SOX1)分化基因在不同培養代次之間的無顯著差異.mRNA水平的上述檢測結果提示本產品可穩定維持多能干細胞的未分化狀態.實際檢測效果會因實驗條件 檢測儀器等的不同而存在差異,圖中效果僅供參考.
人胚胎干細胞(hES H9）在使用 Human Vitronectin包被的情況下,至少培養5代后仍具有多能干細胞的三胚層分化潛能(圖4).
圖4.使用人多能干細胞培養液(C0800)并使用 Human Vitronectin 包被的情況下,培養5代后的人胚胎干細胞(hES H9)仍具有三胚層分化潛能.圖A, H9克隆制備為單細胞后(0 day post differentiation, 0dpd),自發分化形成擬胚體(3dpd和5dpd),并在6dpd接種到BeyoEmbryo™ 0.1%明膠溶液(C0316)包被下培養24小時(7dpd)后形態學特征.圖B,RT-PCR結合電泳檢測7dpd時早期分化基因的表達變化.內胚層(hSOX17和AFP) 中胚層(hT(Brachyury)和BMP4) 外胚層(OTX1和SOX1)均能在7dpd時顯著增加.圖B中PCR擴增片段為：SOX17 (199bp)；AFP (215bp)；BMP4 (112bp)；hT(Brachyury) (121bp)；SOX1 (425bp)；OTX1 (121bp).*,非特異擴增條帶(大小不符).實際檢測效果會因實驗條件等的不同而存在差異,圖中效果僅供參考.
人胚胎干細胞(hES H9）在使用 Human Vitronectin 包被的情況下,連續培養人胚胎干細胞50代后仍能保持未分化狀態和遺傳穩定性(圖5).
圖5.使用人多能干細胞培養液并使用 Human Vitronectin 包被的情況下,人胚胎干細胞H9細胞連續培養傳代50次后仍能保持未分化狀態并具有遺傳穩定性.圖A,免疫熒光檢測發現多能干細胞標志物Tra-1-60 SOX2和OCT4高水平表達,表明細胞處于未分化狀態.圖B, 免疫熒光檢測發現內 中 外胚層早期分化標志物AFP hT(Brachyury)和Nestin均為陰性,表明細胞處于未分化狀態.圖中綠色代表相應蛋白標志物的免疫熒光染色,藍色為DAPI染色.圖C, 傳代50次后的H9克隆核型分析(Karyotype analysis)顯示長期傳代后的遺傳穩定性(染色體數量).實際檢測效果會因實驗條件等的不同而存在差異,圖中效果僅供參考.
人胚胎干細胞(hES H9）在使用 Human Vitronectin 包被的情況下,連續培養人胚胎干細胞50代后的多能干細胞三胚層分化潛能檢測如圖6所示.
圖6.使用人多能干細胞培養液連續傳代H9細胞50次后仍具有三胚層分化潛能.圖A,H9克隆制備為單細胞后(0dpd),自發分化下形成擬胚體(3dpd和5dpd),并在6dpd接種到BeyoEmbryo™ 0.1%明膠溶液(C0316)包被下培養24小時(7dpd)后形態學特征.圖B,qRT-PCR定量分析對比0dpd (未分化)和自發分化7天(7dpd)后,多能性(Pluripotency)標志基因NANOGmRNA水平大幅下降,而三胚層分化標志物SOX17 (內胚層) hT(Brachyury) (中胚層)和Nestin (外胚層)均明顯上調,提示在連續傳代50次的長期培養下,本產品仍然能維持多能干細胞的三胚層分化潛能.實際檢測效果會因實驗條件等的不同而存在差異,圖中效果僅供參考.
