細(xì)胞名稱
PA317小鼠成纖維細(xì)胞 背景資料
PA317細(xì)胞株源自TK- NIH/3T3細(xì)胞，通過pBR322中的包裝結(jié)構(gòu)DNA(pPAM3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉(zhuǎn)染構(gòu)建而成。 通過感染或轉(zhuǎn)染將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入這些細(xì)胞，結(jié)果生成可以感染許多哺乳動物細(xì)胞的雙嗜性載體顆粒。 這株細(xì)胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因?qū)肴祟悺?可能因?yàn)橛糜跇?gòu)建這株細(xì)胞而轉(zhuǎn)入的DNA丟失，能夠包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的PA317細(xì)胞百分比隨傳代而減少。 在包含0.03 mM 次黃嘌呤, 0.001 mM 氨甲喋呤和0.02 mM 胸苷的培養(yǎng)基中短暫(大約5天)選擇，可以選出保留了包裝功能的細(xì)胞。 選擇后，細(xì)胞應(yīng)在HT培養(yǎng)基(0.03 mM 次黃嘌呤,0.02 mM 胸苷)中培養(yǎng)4天，以稀釋殘留的氨甲喋呤。 細(xì)胞來源
ATCC 代次
P3 規(guī)格
T25 細(xì)胞數(shù)
50-100萬 價格
電議 生物安全級別
2 組織來源
胚胎 細(xì)胞形態(tài)
貼壁；成纖維細(xì)胞樣 細(xì)胞活力
95％（Viability by Trypan Blue Exclusion） 細(xì)胞檢測
細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌 培養(yǎng)條件
DMEM （高糖）+10% FBS；37℃，5% CO2 傳代方法
建議1:2-1:3 兩天換液一次 凍存條件
完全培養(yǎng)基50%+40%FBS+10%DMSO
細(xì)胞收到后處理：
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松）
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
