一. 試劑盒說明
綠色熒光蛋白1962年在一種學(xué)名Aequoreavictoria的水母中發(fā)現(xiàn)。其基因所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，在藍(lán)色波長(zhǎng)范圍的光線激發(fā)下，會(huì)發(fā)出綠色螢光。這個(gè)發(fā)光的過程中還需要冷光蛋白質(zhì)Aequorin的幫助，且這個(gè)冷光蛋白質(zhì)與鈣離子(Ca2+)可產(chǎn)生交互作用。本產(chǎn)品將綠色熒光蛋白的基因插入慢病毒介導(dǎo)的載體中，通過flap-Ub啟動(dòng)子過表達(dá)從而作為報(bào)告基因，在細(xì)胞中表達(dá)。常用于細(xì)胞標(biāo)記后移植追蹤，從而評(píng)估移植后細(xì)胞的歸巢以及治療效果等。
二.試劑盒組份
| 組份 | Cat： | 儲(chǔ)存條件 |
| 綠色熒光蛋白標(biāo)記液 | 1 ml | 4 ℃ |
| polybrene | 8 μg/ml | 4℃ |
三. 注意事項(xiàng)
綠色熒光標(biāo)記液避免反復(fù)凍融，操作時(shí)要戴手套和口罩。該產(chǎn)品僅限于非臨床性科研使用。
四. 操作步驟
細(xì)胞傳代培養(yǎng)到6孔板或者6cm盤中12-16小時(shí)后，將綠色熒光蛋白標(biāo)記液0.3ml（6孔板一個(gè)孔中）或者0.5ml（6cm盤）分別與新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液混勻，比例為0.3ml綠色熒光蛋白標(biāo)記液中加入0.7ml新鮮培養(yǎng)液和1.0μl polybrene（終濃度8ng/ml），0.5ml綠色熒光蛋白標(biāo)記液中加入1.5ml新鮮培養(yǎng)液和2μl polybrean（終濃度8ng/ml）。預(yù)混好的綠色熒光蛋白標(biāo)記液加入到目的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，此時(shí)細(xì)胞密度不宜超過60%。2個(gè)小時(shí)之內(nèi)每間隔15-30min輕輕晃動(dòng)被標(biāo)記的細(xì)胞培養(yǎng)皿，可以達(dá)到更好的標(biāo)記效果，2小時(shí)之后培養(yǎng)皿中補(bǔ)充等體積的新鮮培養(yǎng)液，過夜培養(yǎng)后更換成新鮮培養(yǎng)液。48小時(shí)之后，在熒光顯微鏡下觀察標(biāo)記綠色熒光效率。
