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炭疽芽孢桿菌PCR試劑盒

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產品及特點

炭疽芽孢桿菌(Bacillus anthracis) 屬于芽孢桿菌屬,是引起某些家畜、野獸和人類炭疽病(人畜共患)的病原菌。發病率最高的是牛羊,豬也可發生,人常因屠宰、食用或與病死畜接觸而感染。炭疽桿菌對社會公共衛生和經濟發展的危害,迄今仍占相當大的比重。由該菌引起的炭疽病幾乎遍及世界各地,四季均可發生,因此快速檢測炭疽芽孢桿菌具有重要意義。本試劑盒根據熒光定量PCR原理開發,它具有下列特點:

1. 即開即用,用戶只需要提供細菌DNA模板。

2. 引物經過精心優化,專一性強,只擴增炭疽芽孢桿菌

3. 提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。

4. PCR mix中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。

5. 試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次。

6. 本產品只能用于科研

 

規格及成分

成  份

編號

十孔包裝

PCR MagicMix 3.0

90805

1 mL(亮黃蓋

超純水

100935

1 mL(藍色)

炭疽芽孢桿菌PCR引物混合液

13-25410yw

100 μL(白

炭疽芽孢桿菌PCR陽性對照

13-25410pc

100 μL(黃

天凈沙DNA釋放劑試用裝

130982

50次(試用裝)

使用手冊

13-25410sc

1份

 

 

運輸及保存

低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年陽性對照需要單獨放置,不要污染其他試劑。

 

自備試劑

樣品DNA

 

使用方法

一、樣品DNA的制備

1. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照)一個是NC樣品制備陰性對照)。可以用10μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟次制備要求的體積一樣以此作為PC另外用水作為NC。

2. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數細菌DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的細菌DNAout細菌DNAout。本試劑盒免費贈送50次免DNA提取的天凈沙DNA釋放劑,本產品的裂解液可以直接作為PCR模板,省略了DNA提取步驟。

二、設置PCR反應(40 μL體系)

3. 對N+2個樣品,在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照,故需要設置N+4個反應。在N+4個PCR管中分別加入下列成分:

成分

N+2

樣品

PCR陰性對照

PCR陽性對照

PCR MagicMix 3.0

各20 μL

20 μL

20 μL

炭疽芽孢桿菌 PCR引物混合液

各2 μL

2 μL

2 μL

N+2個樣品DNA模板

各18 μL

-

-

樣品制備陰性對照

-

18 μL

-

樣品制備陽性對照

-

-

18 μL

4. 下表設置PCR反應:

過程

溫度

時間

預變性

94

5 min

PCR反應

(35個循環)

94

20 sec

50

20 sec

72℃

30 sec

最后延伸

72

10 min

三、電泳檢測

5. 取10-20 μL PCR產物。電泳檢測PCR產物。本產品提供的PCR Mix在擴增結束后可以直接上樣,不需要另外再加loading buffer。預期的PCR產物長度為208bp。陽性對照必須有此條帶出現,陰性對照必須無任何擴增,否則實驗無效。對沒有擴增產物的樣品,可以稀釋10倍后重復PCR擴增以排除PCR抑制劑的感染。

 

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