| 細胞名稱 | 人視網(wǎng)膜周細胞-永生化 |
| 貨號 | YS0878 |
| 種屬 | 人 |
| 組織來源 | 視網(wǎng)膜 |
| 永生化方法 | 轉(zhuǎn)入 Sv40 和 hTERT 基因 |
| 生長方式 | 貼壁 |
| 安全性 | 所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護 |
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人視網(wǎng)膜周細胞培養(yǎng) | 培養(yǎng)基：DMEM 高糖+10%胎牛血清+1%雙抗 |
| 配套培養(yǎng)基：（YS-120） | |
| 溫度：37℃ | |
| 氣相：95%空氣，5%二氧化碳 | |
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人視網(wǎng)膜周細胞傳代 | 收到細胞后，請對細胞培養(yǎng)瓶外表進行消毒，將細胞置于培養(yǎng)箱中進行 1-2 小時的緩 |
| 沖，待細胞恢復基本生長狀態(tài)后，進行后續(xù)細胞實驗。 | |
| 在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況： | |
| （一）細胞未長至 85%時，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到生物操作臺內(nèi)，嚴格無 | |
| 菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，若培養(yǎng)瓶上無特殊標注，吸去剩余培養(yǎng)液，只留 6-8ml培 | |
| 養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。 | |
| （二）細胞已長滿（達 85-95%）。即可進行傳代，具體步驟如下： | |
| 1.棄去培養(yǎng)液，用 PBS 洗滌 1-2 次， | |
| 2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化，顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞回縮變圓、 | |
| 透亮、輕拍甁壁呈流沙樣脫落，則迅速拿回操作臺，加入雙倍的含 10%血清的完全培 | |
| 養(yǎng)液，終止消化并輕輕吹打細胞，使其變成單細胞懸液， | |
| 3.將細胞收集于離心管中離心 1000rmp/5min，棄上清，輕彈管底，將細胞彈散， | |
| 4.加入新鮮培養(yǎng)液重懸細胞，進行傳代、凍存， | |
| 5.如果沒有特別說明，建議收到細胞后的第一次傳代比例為 1:2。 | |
| 注：1.觀察細胞密度最好用（4X物鏡）低倍鏡觀察，以便正確的判斷細胞密度；觀 | |
| 察細胞形態(tài)請用（10X 或 20X）高倍鏡觀察； | |
| 2.瓶中運輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復使用，請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)； | |
| 3.有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落，可離心重懸后接種到新瓶內(nèi)； | |
| 4.收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細胞污染，請及時與我們聯(lián)系。 | |
| 人視網(wǎng)膜周細胞保存 | 凍存條件：70%基礎培養(yǎng)液+20%胎牛血清+10%DMSO 保存條件：液氮存儲 |
| 供應限制 | 僅供研究之用 |
| 常見問題 | 1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師 |
| 及 | 解決。 2.細胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2 小時后觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 8-10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度 85-95%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁， 將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我 們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。。 |
| 解決方案 | |
