無酚無氯仿柱式植物 RNAOUT是在柱式植物RNAOUT（CAT#：71203）的基礎上經過配方和流
程優化得到的無氯仿升級產品，它結合了植物RNAout的高效性、快捷性以
及無氯仿處理的安全性。該產品特點如下：
1. 免酚和氯仿處理，操作安全可靠。
2. 簡單快速，處理一個樣品只需要約十分鐘。
3. RNA 純度更高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右，能夠有效去除
大 多數植物中的多糖污染。
4. 目前已測試過上百種植物。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交和cDNA合成等實驗。
6. 性價比高于進口的柱式植物 RNA 提取產品。
1. 估算組織細胞的用量。每次微量提取一般需要 50-100 mg 植物葉片、或
30-50mg 植物種子、或 100-200mg 植物果實。不能多加，否則容易堵
柱。無氯仿提取處理的量比常規的加氯仿處理量要少一倍，否則非常容易
堵柱，但是否堵柱又取決于植物組織的多糖多酚的濃度。
2. 樣品破碎：
1) 勻漿法：先將新鮮植物組織剪切成小塊(保存在 RNALOCKER 中的植物
組織需用紙吸去 RNALOCKER 液體后再剪切成小塊)，放入 10-15 mL
塑料離心管中，加入 1 mL 溶液 A，然后用勻漿器勻漿 5-20 秒。勻
漿時會產生泡沫，但不影響提取效果。
2) 液氮研磨法（適用于復雜，易降解樣品）：取適量新鮮植物組織放入
含液氮的研缽中，迅速將組織研磨成粉末后，將粉末轉移到合適的塑
料離心管中，加入 1 mL 溶液 A，立即劇烈振蕩 20 秒，充分混勻。
注意：如果不小心將溶液 A 放置在 4℃，則可能會產生沉淀，使用前
必須放在 65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
3. 將勻漿物或液氮研磨物轉移至干凈的 1.5 mL 塑料離心管中(可以不必轉
移非液體的細胞碎片)。有的植物組織（比如果實）含有大量水份，勻漿液
會多于 1 mL，轉移時也只取 1 mL。
4. 室溫 12000-15000 g 離心 3-5 分鐘，管底沉淀為細胞破碎物。
5. 將上清液(約 1 mL)轉移到另一干凈的 2 mL 塑料離心管中。
6. 加入等體積的溶液 B，充分顛倒混勻。如果有沉淀產生（對某些植物，屬
于正常現象），千萬不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
7. 將 0.7mL 的混合溶液轉移到離心吸附柱中，g 室溫離心 3
到 5 分鐘，棄穿透液。如果離心吸附柱里面有殘留液體沒穿透，可以延長
離心時間直到徹底穿透。
8. 將剩下的混合溶液按每次 0.7mL 的方式轉移到同一離心吸附柱中， 每次
g 室溫離心 3-5 分鐘，棄穿透液。
9. 由于混合液有 2mL 左右，所以三次轉移即可將混合液全部掛柱。
10. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室溫 g 離心半分鐘，棄穿透液。
如果離心吸附柱里面有殘留液體沒穿透，可以延長離心時間直到徹底穿
透。
11. 再加 0.3 mL 通用洗柱液，室溫 g 離心半分鐘，棄穿透液。
12. 12000 rpm 室溫離心 10 秒以便去除殘留液體。此步很重要，否則殘留
的乙醇會影響 RNA 的使用。
13. 將離心吸附柱轉移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 uL RNA 洗脫
液，室溫放置 1-2 分鐘。
14. g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 RNA 樣品，可以立
即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做 Northern 雜交，強烈建議用戶使用
甲醛變性膠進行 RNA 電泳，因為非變性膠不能分離所有的 RNA 分子
（BioTechniques，28：414，2000）。
16. RNA 產量產率測定：將 5-10 μL RNA 溶于 TE 緩沖液中(pH7.5-8.2 之
間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260
的 RNA=40 μg/mL），進而計算出 RNA 的產量（濃度 X 體積)和產率(RNA
產量/組織用量)。
17. RNA 純度測定：無污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之
間(具體數值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關)，高于此范圍則分
別表示樣品可能有蛋白質污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應。
