Kinase-Lumi™超強型化學發光法激酶活性檢測試劑盒(Kinase-Lumi™ Max Luminescent Kinase Assay Kit),是一種通過化學發光法測定激酶反應后溶液中ATP的剩余量(最高可達200μM)來定量檢測激酶活性的試劑盒。本試劑盒也可用于檢測任何消耗ATP的酶,例如ATPase。
本試劑盒可以檢測反應體系中濃度高達200μM的ATP,并在0-200μM范圍內有良好的線性關系。對于更低濃度的ATP可以選購檢測濃度上限為10μM的Kinase-Lumi™化學發光法激酶活性檢測試劑盒(Kinase-Lumi™ Luminescent Kinase Assay Kit)或上限為50μM的Kinase-Lumi™增強型化學發光法激酶活性檢測試劑盒(Kinase-Lumi™ Plus Luminescent Kinase Assay Kit)。另外兩個試劑盒分別在0-10μM和0-50μM范圍內有良好的線性關系。對于更高濃度的ATP需要適當稀釋后再進行檢測。
本試劑盒應用范圍廣,適用于各類消耗ATP的激酶,包括以蛋白或多肽為底物的蛋白激酶和以糖、脂、醇等為底物的非蛋白激酶。本試劑盒也同樣適用于檢測消耗ATP的ATPase。
本試劑盒的檢測激酶活性的原理參考圖1。激酶在反應過程中催化ATP上的磷酸基團轉移到底物的羥基上,從而使ATP轉變為ADP,這樣就可以根據ATP的減少量來定量激酶的活性。借助ATP依賴的螢光素酶(也稱熒光素酶)催化的螢光素發光反應,ATP可以通過測定化學發光來進行定量。這樣就可以通過設置ATP的標準曲線,來定量激酶反應體系中的ATP剩余量,從而計算出ATP的消耗量,最終計算出激酶的活性。激酶的活性和ATP的剩余量成反比,即激酶活性越高,ATP剩余量越少,發光值越低;反之,激酶活性越低,ATP剩余量越多,發光值越高。
圖1. 本試劑盒檢測激酶活性的原理圖。
本試劑盒的使用非常便捷,對于待測樣品僅需加入等體積的檢測試劑即可完成檢測反應,并且檢測反應可以僅在一個孔內完成。本試劑盒不僅適合少量樣品的檢測,也非常適合大量樣品的高通量篩選(high-throughput screening)檢測。
本試劑盒不僅操作特別方便,并且由于使用了熱穩定的螢火蟲螢光素酶并對反應體系進行了優化,檢測體系的發光信號也非常穩定。加入檢測試劑后10分鐘即可產生非常穩定的化學發光,30分鐘內化學發光的下降通常不會超過10%。
對于96孔板,我們推薦使用50μl激酶反應體系和50μl的檢測試劑,總體積為100μl,此時本試劑盒可以進行200或2000次檢測。對于384孔板,我們推薦使用10μl激酶反應體系和10μl的檢測試劑,總體積為20μl,此時本試劑盒可以進行1000或10000次檢測。也可以用其它體積,但激酶反應體積和檢測試劑體積的比例必須為1:1。
包裝清單:
產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
S0158S-1 | Kinase-Lumi™超強型化學發光法激酶活性檢測試劑 | 10ml |
S0158S-2 | 0.5mM ATP | 0.2ml |
— | 說明書 | 1份 |
保存條件:
-20℃保存,半年有效。-80℃保存,一年有效。檢測試劑需避光保存。
注意事項:
本試劑盒的檢測試劑中含有螢光素酶,反復凍融會導致其逐漸失活。為取得較好的使用效果,第一次解凍后可適當分裝,且分裝后的檢測試劑凍融次數不宜超過3次。反復凍融過程中,可能會導致檢測試劑中出現少量沉淀,此時宜平衡至室溫,并盡量溶解。如仍有殘留的不溶物,可以離心去除后使用,經測試不會影響后續的檢測效果。
建議激酶或ATPase的反應盡量在室溫(約25℃)進行,如果不是在室溫進行,需把樣品平衡至室溫才能用本試劑盒檢測。
試劑盒中提供的ATP僅足夠用于標準曲線的檢測,用于激酶反應的ATP需自備。
檢測時需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相鄰孔之間會產生相互干擾。
本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。