EdU-488細胞增殖檢測試劑盒( EdU Cell Proliferation Kit with Alexa Fluor 488)，是一種基于DNA合成過程中胸腺嘧啶脫氧核苷(thymidine)類似物EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)的摻入，并通過隨后的點擊反應(Click reaction)使EdU被Alexa Fluor 488所標記，從而實現簡單、快速、高靈敏地檢測細胞增殖的試劑盒。

本試劑盒可以檢測到細胞或組織樣品中單個的增殖細胞，同時也可以對細胞或組織樣品總體的細胞增殖情況進行定量檢測。本試劑盒可以檢測培養的細胞或組織樣品，也可以檢測組織切片。
經本試劑盒處理后，增殖的細胞在熒光顯微鏡下呈現非常明亮的綠色熒光，可以用于熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀或熒光酶標儀檢測，也可以用于高內涵篩選(High-Content Screening, HCS)。流式細胞儀或熒光酶標儀檢測僅適用于細胞樣品，不適用于組織切片。
細胞增殖能力的檢測是評估細胞活性、基因毒性和抗腫瘤藥物效果等的基本方法。公認的最精確的檢測細胞增殖的方法是直接檢測細胞中DNA的合成。最初廣泛使用的通過檢測DNA合成來檢測細胞增殖的方法是放射性標記核苷摻入法，如氚標記胸腺嘧啶脫氧核苷([3H]thymidine)摻入法。但該方法由于有放射性污染并且很難實現單細胞檢測而受到很大的限制，隨后逐漸被基于抗體檢測的BrdU(bromo-deoxyuridine)法所替代。BrdU法步驟繁多，且需要使用BrdU抗體，影響因素較多，穩定性比較差。并且由于BrdU法需要使用抗體，有時會和其它目的蛋白基于抗體的檢測相互產生干擾。EdU法基于EdU摻入和后續的點擊反應，無需使用抗體、操作便捷、檢測靈敏度高，是一種在BrdU法基礎上升級換代的新方法，將會逐步取代BrdU法。
MTT法(C0009)、WST-1法(C0035、C0036)、CCK-8法(C0037、C0038、C0039、C0040、C0041、C0042、C0043、C0046)和CellTiter-Lumi™化學發光法(C0065、C0068)都是基于細胞活性的細胞增殖檢測方法，能檢測到細胞的總體增殖效果，但無法檢測到單個的增殖細胞。這幾種方法盡管都不是檢測DNA合成的，但被廣泛用于替代[3H]thymidine摻入法。CFDA SE法(C0051、C1031)基于細胞熒光示蹤的原理能檢測到單個的增殖細胞，但由于每增殖一次熒光減弱一半，在熒光顯微鏡下較難區分熒光減弱一半的細胞，檢測靈敏度不是很高，通常僅適用于流式細胞儀檢測。在進行科學研究時，上述這些基于細胞活性或CFDA SE的方法可以作為EdU法的補充性檢測方法。
EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)，中文名為5-乙炔基-2' -脫氧尿苷，是一種新型胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷，thymidine)類似物，EdU可以在DNA合成過程中替代胸苷摻入到新合成的DNA中。另一方面，EdU上的乙炔基能與熒光標記的小分子疊氮化物探針(如Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555、Azide Alexa Fluor 594、Azide Alexa Fluor 647等)通過一價銅離子的催化發生共價反應，形成穩定的三唑環，該反應非常迅速，被稱作點擊反應(Click reaction)，其反應原理參見圖1。通過點擊反應，新合成的DNA會被相應的熒光探針所標記，從而可以使用適當的熒光檢測設備檢測到增殖的細胞。

圖1.  EdU檢測法中的點擊反應(Click reaction)原理圖。熒光探針等標記的疊氮化物(Labeled Azide)與摻入到細胞DNA中的EdU，在銅離子的催化發生共價反應，形成穩定的三唑環，最終使細胞DNA標記上熒光探針或其它探針。

本試劑盒反應簡單、檢測靈敏度高。本試劑盒基于簡單高效的點擊反應，無需DNA變性，只需少量的小分子疊氮化物探針即可非常有效地標記出摻入的EdU，并且可以檢測到單個細胞的增殖情況。
本試劑盒使用便捷、兼容性好。本試劑盒只需常用的多聚甲醛固定和Triton X-100穿透，就可以使疊氮化物探針有效進入細
胞并發生點擊反應，不會影響細胞形態，不會影響基于抗體的免疫熒光和免疫組化檢測，也不會影響DNA的熒光染色(如PI染色檢測細胞周期、DAPI或Hoechst染料檢測細胞核)。而BrdU法為了使大分子的BrdU抗體進入細胞并與DNA上的BrdU結合，需要對雙鏈DNA進行變性處理(如酸變性、熱變性或者DNase消化等)，這種變性可能會影響細胞形態，影響后續的免疫熒光和免疫組化檢測、DNA的熒光染色等。BrdU法和 EdU法檢測原理的比較參見圖2。

圖2. BrdU法和 EdU法檢測原理的比較。A. BrdU法需使用大分子的BrdU抗體，由于空間位阻，雙鏈DNA須變性后才能使BrdU抗體與BrdU結合。B. EdU法使用小分子標記的疊氮化物(Azide)，無需DNA變性，操作更便捷，兼容性好，檢測結果更加穩定可靠。

本試劑盒檢測快速，定性定量檢測都非常便捷。相對于至少需要4小時的BrdU法，本試劑盒采用的 EdU法檢測新合成的DNA只需1.5-2小時，時間上大大縮短。本試劑盒同時提供了染色細胞核的Hoechst 33342，以方便染色觀察所有的細胞
核。可以使用熒光顯微鏡或流式細胞儀等進行定性和定量檢測。HeLa細胞用本試劑盒和熒光顯微鏡檢測細胞增殖的效果參見圖3；Jurkat細胞用本試劑盒和流式細胞儀檢測細胞增殖的效果參見圖4。

圖3. HeLa細胞用本試劑盒檢測細胞增殖的效果圖。無EdU組觀察不到綠色熒光(最左側一列)；EdU (10μM)孵育2小時組有明亮的綠色熒光(中間一列)；而用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)提前預處理0.5小時后，綠色熒光顯著減弱，說明DNA合成抑制后，EdU的摻入被顯著抑制(最右側一列)。

圖4. Jurkat細胞用本試劑盒標記后用流式細胞儀檢測細胞增殖的效果圖。Jurkat細胞只用EdU標記(左圖)，或在標記的同時用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)處理(右圖)，2小時后用本試劑盒進行點擊反應，然后用流式細胞儀進行檢測。從圖中可以看出，僅EdU標記的細胞有較高比例的綠色熒光(488 fluorescence)陽性細胞，呈現綠色熒光陰性(弱染色)和陽性(強染
色)的兩個峰(左圖)，分別對應于未增殖細胞和增殖細胞。經過羥基脲處理的細胞，綠色熒光陽性的細胞幾乎完全消失(右圖)，僅剩下一個綠色熒光陰性的峰(右圖)。該檢測結果說明DNA合成被抑制后，EdU的摻入也被抑制。實測數據可能會因細胞類型、細胞增殖情況、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數據僅供參考。

本試劑盒小包裝C0071S如果用于培養的細胞(6孔板)的檢測，可以檢測50個樣品，每個樣品的反應體系為500μl的Click反應液；如果用于96孔板檢測，可以檢測500個樣品，每個樣品的檢測體系為50μl的Click反應液；如果用于12孔、24孔、48孔或384孔板樣品的檢測，分別可以檢測125、250、350和1250個樣品，每個樣品推薦的Click反應液用量為200μl、100μl、70μl和20μl。小包裝如果用于流式細胞儀檢測，可以檢測50個樣品，每個細胞樣品的細胞數量宜為10-100萬，每個樣品的反應體系為500μl的Click反應液。小包裝如果用于冰凍或石蠟切片的檢測，可以檢測125-250個樣品， 每個樣品的反應體系為100-200μl的Click反應液。大包裝C0071L可檢測樣品的數量為小包裝C0071S的4倍。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存，一年有效。Azide 488和Hoechst 33342須避光保存。
注意事項：
Click Additive配制成溶液后請注意適當分裝。如果溶解后有白色物質析出，請上下顛倒多次，待全部溶解后使用。如果該溶液顏色變成棕色，說明該組分的有效成分已失效，請棄用。
如果需要使用羥基脲(Hydroxyurea)作為對照，可以從訂購(S1961 Hydroxyurea)。
如果用于動物實驗需要更多EdU，也可以從訂購(ST067 EdU)。
由于本產品需要銅離子催化進行點擊反應，請注意如下的兼容性問題及解決方案。本產品完全兼容有機類染料如Alexa Fluor®系列普通染料及fluorescein (FITC)、Allophycocyanin (APC)及APCE-tandems染料；對于Qdot®納米晶體探針、Horseradish peroxidase (HRP)、R-phycoerythrin (R-PE)和R-PE-tandems染料如Alexa Fluor® 680-R-PE等，需要在點擊反應完成后進行反應和檢測；本產品會影響GFP、RFP、mCherry等熒光蛋白的熒光，對于熒光類蛋白如Green Fluorescent Protein (GFP)、
TC-FlAsH™和TC-ReAsH™類試劑，需要在點擊反應前進行反應和檢測。由于Phalloidin (鬼筆環肽)不兼容點擊反應，推薦使用
Tubulin-Tracker Red (C1050)進行細胞微管的檢測。
本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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