生物素隨機(jī)引物DNA標(biāo)記試劑盒(Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)是一種通過隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)產(chǎn)生生物素標(biāo)記DNA探針的試劑盒。本試劑盒標(biāo)記的生物素DNA探針可以用于常規(guī)的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位雜交等。
在Klenow酶(Klenow fragment,3'-5'exo-)催化下，通過隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)(random prime labeling)可以把生物素標(biāo)記的Biotin-11-dUTP摻入到新合成的DNA探針中，這樣就可以產(chǎn)生生物素標(biāo)記的DNA探針。在隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)過程中，一些標(biāo)記好的DNA探針可以被Klenow酶從模板DNA鏈上驅(qū)趕下來。這樣在模板量較少的情況下，通過隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)，最后可以產(chǎn)生比模板DNA量更多的生物素標(biāo)記DNA探針，可多達(dá)1-15倍左右。
本試劑盒可以用于多種DNA模板的標(biāo)記，包括DNA片段、線性化的質(zhì)粒或cosmid、超螺旋DNA等。用于本試劑盒的模板DNA片段應(yīng)不小于100bp，小于100bp的DNA模板可以使用生物素3'末端DNA標(biāo)記試劑盒(D3106)進(jìn)行DNA探針標(biāo)記。
用于本試劑盒的模板DNA的量應(yīng)不少于10ng，推薦的模板用量為100ng-1μg。
本試劑盒中提供了已經(jīng)用生物素標(biāo)記好的Biotin-Control DNA，可以用作檢測(cè)生物素DNA探針標(biāo)記效率的對(duì)照。
生物素標(biāo)記DNA可以使用化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑盒(D3308)或其它適當(dāng)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。
本試劑盒可以用于10個(gè)標(biāo)記反應(yīng)。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D3118-1 | Random Primer in Buffer(5X) | 105μl |
| D3118-2 | Klenow Fragment | 11μl |
| D3118-3 | Biotin-Labeling Mix | 50μl |
| D3118-4 | Ultrapure Water | 1ml |
| D3118-5 | Biotin-Control DNA(3ng/μl) | 50μl |
| D3118-6 | 探針標(biāo)記終止液 | 100μl |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
需自備用于探針標(biāo)記效率檢測(cè)的相關(guān)試劑。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 在一離心管或PCR管內(nèi)加入100ng-1μg DNA模板，再加入適量試劑盒提供的Ultrapure Water，至總體積為34μl。
說明：通常100-300ng DNA模板已經(jīng)足夠用于一次標(biāo)記反應(yīng)。
2. 加入10μl Random Primer in Buffer (5X)，混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
3. 沸水浴加熱5分鐘，或在PCR儀上100℃加熱5分鐘(如果不能設(shè)置100℃，99℃加熱5分鐘也完全可以)。
4. 立即放置到預(yù)先準(zhǔn)備好的冰水浴中至少2-3分鐘。
5. 加入5μl Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1μl Klenow Fragment，混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
7. 37℃孵育1小時(shí)或過夜(不宜超過20小時(shí))。37℃孵育過夜可以顯著增加生物素標(biāo)記DNA的產(chǎn)量，因此推薦孵育過夜(12-20)小時(shí)。
8. 加入3μl探針標(biāo)記終止液，混勻，終止標(biāo)記反應(yīng)。至此標(biāo)記反應(yīng)已經(jīng)全部完成，標(biāo)記好的DNA可以-20℃保存。
9. 此時(shí)探針可以直接用于探針標(biāo)記效率的檢測(cè)及Southern、Northern等后續(xù)操作。
10. 整個(gè)探針標(biāo)記反應(yīng)的流程參見下表：
| 100ng-1μgDNA模板 | xμl |
| Ultrapure Water | (34-x)μl |
| Random Primer in Buffer (5X) | 10μl |
| 100℃ 5分鐘，立即冰浴冷卻 | |
| Biotin-Labeling Mix | 5μl |
| Klenow Fragment | 1μl |
| 總體積 | 50μl |
| 37℃孵育過夜 | |
| 探針標(biāo)記終止液 | 3μl |
| -20℃保存 | |
| 此時(shí)可用于標(biāo)記效率的檢測(cè)及Southern、Northern等后續(xù)檢測(cè) | |
11. 探針標(biāo)記效率的檢測(cè)：可以對(duì)標(biāo)記好的探針進(jìn)行適當(dāng)梯度稀釋后，使用化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑盒(D3308)或其它適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行檢測(cè)。通常探針的標(biāo)記效率可以參考下表：
| 模板DNA量 | 生物素標(biāo)記DNA產(chǎn)量 | |
| － | 孵育1小時(shí) | 孵育20小時(shí) |
| 10ng | 80ng | 900ng |
| 30ng | 150ng | 1350ng |
| 100ng | 350ng | 1650ng |
| 300ng | 750ng | 2200ng |
| 1000ng | 1300ng | 2600ng |
| 3000ng | 1600ng | 2600ng |
注意：具體的探針標(biāo)記效率還和模板DNA的長(zhǎng)度、純度等因素有關(guān)，上表的數(shù)值僅供參考。
12. 使用本試劑盒所獲得的生物素標(biāo)記DNA的長(zhǎng)度通常在數(shù)百bp左右。具體的長(zhǎng)度因模板的長(zhǎng)度而有所不同。例如模板DNA的長(zhǎng)度為1kb，則生物素標(biāo)記DNA產(chǎn)物的長(zhǎng)度通常為100-1000bp，平均長(zhǎng)度約為300bp左右。
