BL21(DE3)pLysS甘油菌，是收集生長在對數(shù)期的BL21(DE3)pLysS菌，加入含有甘油的細(xì)菌凍存液制備而成�？梢灾苯觿澠桨寤蛐×�、大量培養(yǎng)。本菌株適用于T7啟動子(T7 promoter)調(diào)控目的基因表達(dá)的pET系列等原核表達(dá)質(zhì)粒，特別適合于影響細(xì)菌生存和活力的外源毒性蛋白的IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。

BL21缺失細(xì)胞質(zhì)中的Lon蛋白酶(Lon protease)和胞外膜上的OmpT蛋白酶(OmpT protease)，能有效避免重組表達(dá)蛋白的降解，所以被廣泛用作外源蛋白的表達(dá)菌株。

BL21(DE3)是BL21被λ噬菌體DE3溶原化(lysogenization)的衍生菌株，在lacUV5啟動子控制下可表達(dá)噬菌體T7 RNA聚合酶(相關(guān)基因序列已經(jīng)整合到細(xì)菌染色體中)。IPTG可以誘導(dǎo)BL21(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的高表達(dá)，因此BL21(DE3)菌株適合受T7啟動子(T7 promoter)調(diào)控的目的基因通過IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。常見的pET系列原核表達(dá)載體中目的基因的表達(dá)都是受T7啟動子調(diào)控的，因此都適合用BL21(DE3)作為宿主菌。

BL21(DE3)pLysS菌株攜帶pLysS質(zhì)粒，具有氯霉素抗性，可以表達(dá)能降解T7 RNA聚合酶的T7溶菌酶(T7 lysozyme)，從而可以抑制T7 RNA聚合酶在目的蛋白被IPTG誘導(dǎo)前的本底表達(dá)，即導(dǎo)致本底性的外源重組蛋白的表達(dá)被有效抑制。因此本菌株特別適合于影響細(xì)胞生存和活力的外源毒性蛋白的表達(dá)。

BL21(DE3)pLysS菌株基因型：F- ompT hsdSB (rB- mB- ) gal dcm (DE3) pLysS (CamR)

BL21(DE3)pLysS菌株核酸酶表達(dá)水平較高，在利用其進(jìn)行被轉(zhuǎn)化質(zhì)粒提取時，為充分避免核酸酶的影響，可使用質(zhì)粒小量抽提試劑盒(通用型) (D0007S或D0007M)、質(zhì)粒中量抽提試劑盒(通用型) (D0020)或質(zhì)粒大量抽提試劑盒(通用型) (D0028)進(jìn)行質(zhì)粒抽提。

本菌株可以使用常規(guī)的LB培養(yǎng)基或SOC培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 包裝清單：

保存條件：

-20℃保存，一年有效。-80℃可以長期保存。

注意事項：

使用本甘油菌時可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加細(xì)菌的活力會逐漸下降。在沒有結(jié)凍的情況下，菌體會逐漸沉淀至管底，請務(wù)必注意適當(dāng)混勻后使用。

為保證菌種純正，避免其它細(xì)菌污染，盡量先劃平板然后再挑單克隆菌落進(jìn)行后續(xù)操作。

本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

1. 劃平板接種：
取出BL21(DE3)甘油菌置于冰上，并置于超凈臺內(nèi)，后續(xù)操作都在超凈臺內(nèi)操作。
a. 用鑷子和塑料槍頭操作：鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精燈上略略燒一下，使鑷子的頂端處于無菌狀態(tài)。用鑷子夾取一個無菌的200µl塑料槍頭，蘸取少量BL21(DE3)pLysS甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料槍頭，以盡量和LB平板(含有20µg/ml氯霉素)接近平行的角度，在LB平板上連續(xù)作S形或Z形劃動，再用一無菌的200µl塑料槍頭，在原先的劃線上以90°或120°角，再在LB平板上連續(xù)作S形或Z形劃動。通常換槍頭重復(fù)操作2-3次即可。37℃倒置培養(yǎng)過夜。
b. 用接種環(huán)操作：將接種環(huán)在酒精燈上略略燒一下，使接種環(huán)處于無菌狀態(tài)。微冷后，蘸取少量BL21(DE3)pLysS甘油菌，在LB平板(含有50µg/ml氯霉素)上連續(xù)作S形或Z形劃動。把接種環(huán)再燒一下，微冷后，在原先的劃線上以90°或120°角，再在LB平板上連續(xù)作S形或Z形劃動。通常用接種環(huán)重復(fù)操作2-3次即可。37℃倒置培養(yǎng)過夜。
2.直接培養(yǎng)：
a.取出BL21(DE3)pLysS甘油菌置于冰上，并置于超凈臺內(nèi)，后續(xù)操作都在超凈臺內(nèi)操作。把鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精燈上略略燒一下，使鑷子的頂端處于無菌狀態(tài)。用鑷子夾取一個無菌的塑料槍頭或牙簽，蘸取少量BL21(DE3)pLysS甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料槍頭或牙簽放到裝有3ml LB(含有20µg/ml氯霉素)的細(xì)菌培養(yǎng)試管內(nèi)或裝有100ml或更大體積LB(含有20µg/ml氯霉素)的細(xì)菌培養(yǎng)瓶內(nèi)。37℃，約200rpm培養(yǎng)過夜。
3.感受態(tài)細(xì)菌的制備
可以使用一步法感受態(tài)細(xì)菌制備試劑盒(D0301)、超級感受態(tài)細(xì)菌制備試劑盒(D0302)或其它方法進(jìn)行感受態(tài)細(xì)胞​