ER-Tracker Red是一種具有細胞膜通透性的內質網(endoplasmic reticulum, ER)紅色熒光探針,對內質網有高度選擇性,可以用于活細胞內質網特異性熒光染色。
ER-Tracker Red為采用Molecular Probes公司的BODIPY TR進行了熒光標記的glibenclamide。Glibenclamide即glyburide,中文名為格列苯脲,是一種2型糖尿病治療藥物,可以結合主要定位在內質網上的包含ATP敏感的鉀離子通道(KATP channel)的磺脲類(sulphonylurea)受體。因此熒光標記的glibenclamide就可以用作內質網特異性的熒光探針。ER-Tracker Red適用于活細胞內質網的熒光染色,但不適合用于固定細胞內質網的熒光染色。
ER-Tracker Red的分子式為C44H42BClF2N6O7S2,分子量為915.23,ER-Tracker Red的化學結構式參考圖1。
圖1.ER-Tracker Red的化學結構式。ER-Tracker Red對于細胞的毒性極低。而傳統的DiOC6(3)對ER染色的同時也對細胞有一定的毒性。
ER-Tracker Red呈紅色熒光,檢測時的最大激發波長為587nm,最大發射波長為615nm。ER-Tracker Red的激發光譜和發射光譜參考圖2。
圖2.ER-Tracker Red的激發光譜和發射光譜。ER-Tracker Red按照后附的使用說明染色后,用甲醛等固定后染色效果可以被部分保留。ER-Tracker Red在活細胞中的染色效果參考圖2。
圖3.ER-Tracker Red在HeLa細胞中的染色效果。Hoechst 33342染色的HeLa細胞其細胞核呈現藍色熒光; ER-Tracker Red染色的HeLa細胞其內質網呈現紅色熒光。
提供了ER-Tracker Red 稀釋液,使ER-Tracker Red的使用更加便捷。
按照1:1000的比例稀釋,可以配制20ml ER-Tracker Red工作液;按照1:3000的比例稀釋,可以配制60ml ER-TrackerRed工作液。
包裝清單:
產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
C1041-1 | ER-Tracker Red(1mM) | 20μl |
C1041-2 | ER-Tracker Red稀釋液 | 60ml |
- | 說明書 | 1份 |
保存條件:
-20℃保存,半年有效。ER-Tracker Red需-20℃避光保存。
注意事項:
ER-Tracker Red(1mM)在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。對于微量的液體,每次使用前先離心數秒鐘,使液體充分沉降到管底。
熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
需自備蓋玻片和載玻片
格列本脲的藥理學活性可能會影響內質網的一些功能;某些特殊細胞中磺脲類受體的可變表達可能會導致非內質網特異性染色。
ER-Tracker Red適用于活細胞內質網的熒光染色,但不適合用于固定細胞內質網的熒光染色。如果經ER-Tracker Red染色后的細胞需要進行固定操作,使用4%多聚甲醛在37℃固定2分鐘。
ER-Tracker Red染色后的細胞不能用Triton X-100通透,Triton X-100通透處理會導致ER-Tracker Red的熒光染色消失。
本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明:
1.ER-Tracker Red工作液的配制:
a.取少量ER-Tracker Red按照1:1000的比例加入到ER-Tracker Red 稀釋液中。例如取1μl ER-Tracker Red加入到1ml ER-Tracker Red 稀釋液中。混勻后即為ER-Tracker Red工作液。
b.ER-Tracker Red工作液使用前需37℃預溫育。
注:工作液中ER-Tracker Red的濃度可以根據實際情況進行適當調整,推薦的稀釋比例調整范圍為1:1000-1:3000。為降低背景,在染色效果可以接受的范圍內,建議盡量使用較低濃度的ER-Tracker Red。
2.內質網的熒光標記:
a.去除細胞培養液,用適量的溶液如HBSS with Ca2+ & Mg2+ (Hanks' Balanced Salt Solution with Ca2+ & Mg2+)洗滌生長在蓋玻片上的細胞。注:HBSS with Ca2+ & Mg2+ (C0219)可以向公司訂購;對于懸浮細胞的染色可以參考貼壁細胞的染色方法進行。
b.去除洗滌液,加入步驟1配制好的并37℃預溫育的ER-Tracker Red染色工作液,與細胞37℃共孵育15-30分鐘。
c.去除ER-Tracker Red染色工作液,用細胞培養液洗滌細胞1-2次。
d.隨后通常用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡進行觀察。此時可觀察到內質網呈明亮的強熒光染色。
e.如果經ER-Tracker Red染色后的細胞需要進行固定,可以使用4%甲醛37℃固定2分鐘。固定后用適當的洗滌液洗滌2-3次,每次5分鐘,隨后可以進行復染或滴加適當的抗熒光淬滅封片液,最后封片觀察。注意:ER-Tracker Red染色的細胞不能用Triton X-100通透,Triton X-100通透處理會導致ER-Tracker Red的熒光染色消失。