Lyso-Tracker Red是一種溶酶體(lysosome)紅色熒光探針,能通透細胞膜,可以用于活細胞溶酶體特異性熒光染色。
Lyso-Tracker Red為采用Molecular Probes公司的DND-99進行了熒光標記的帶有弱堿性的熒光探針,其中僅弱堿可部分提供質子,以維持pH在中性,可以選擇性地滯留在偏酸性的溶酶體中,從而實現對于溶酶體的特異性熒光標記。中性紅(Neutral Red)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以對溶酶體進行熒光染色,但中性紅和吖啶橙的染色缺乏特異性。Lyso-Tracker Red適用于活細胞溶酶體的熒光染色,但不適合用于固定細胞溶酶體的熒光染色。Lyso-Tracker Red分子的化學結構式參考圖1。
圖1.Lyso-Tracker Red的化學結構式。Lyso-Tracker Red的分子式為C20H24BF2N5O,分子量為399.25,最大激發波長為577nm,最大發射波長為590nm。Lyso-Tracker Red的激發光譜和發射光譜參考圖2。
圖2.Lyso-Tracker Red的激發光譜和發射光譜。Lyso-Tracker Red是嗜酸性熒光探針,用于活細胞內酸性細胞器的標記和示蹤。這些探針具有幾個重要特征,包括高度選擇靶向酸性細胞器和在納摩爾濃度有效標記活細胞。Lyso-Tracker Red必須在極低濃度(通常約50nM)下才能獲得優異的選擇性。這些探針的滯留(retention)機制雖然沒有被研究清楚,但很可能與酸性細胞器的質子化和滯留性有關,Lyso-Tracker Red探針的內吞作用動力學研究顯示染料進入活細胞的攝入時間僅幾秒即可。然而,這些溶酶體探針會導致溶酶體被堿化,長期孵育會誘使溶酶體pH值的增加。因此,建議成像前用探針孵育細胞的時間不能太久。Lyso-Tracker Red探針具體使用濃度和孵育時間需要根據自身實驗條件和具體細胞種類來進行摸索以達到滿意的染色效果。Lyso-Tracker Red在活細胞中染色效果參考圖3。
圖3.Lyso-Tracker Red在HeLa細胞中的染色效果。Hoechst 33342染色的HeLa細胞其細胞核呈現藍色熒光;Lyso-Tracker Red染色HeLa細胞的溶酶體,呈現紅色熒光。
Lyso-Tracker Red適用于活細胞溶酶體的熒光染色,但不適合用于固定細胞溶酶體的熒光染色。如果經Lyso-Tracker Red染色后的細胞需要進行固定操作,可以嘗試3%的戊二醛(glutaraldehyde)。
按照1:20000的比例稀釋,可以配制1000ml Lyso-Tracker Red工作液。
包裝清單:
產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
C1046 | Lyso-Tracker Red (1mM) | 50µl |
- | 說明書 | 1份 |
保存條件:
-20℃避光保存,半年有效。
注意事項:
Lyso-Tracker Red (1mM)在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。對于微量的液體,每次使用前先離心數秒鐘,使液體充分沉降到管底。
熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
Lyso-Tracker Red適用于活細胞溶酶體熒光染色,但不適合用于固定細胞溶酶體的熒光染色。如果經Lyso-Tracker Red染色后的細胞需要進行固定操作,可以嘗試3%的戊二醛(glutaraldehyde)。
需自備蓋玻片和載玻片(可以向雅吉生物訂購)。
本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明:
1.Lyso-Tracker Red工作液的配制:
a.取少量Lyso-Tracker Red按照1:13333-1:20000的比例加入到細胞培養液或適當的溶液(例如含鈣鎂離子的HBSS)中,使最終濃度為50-75nM。例如取1µl Lyso-Tracker Red加入到20ml或13.33ml細胞培養液或適當的溶液(例如含鈣鎂離子的HBSS)中。混勻后即為Lyso-Tracker Red工作液。HBSS with Ca2+ & Mg2+ (C0219)可以向雅吉生物訂購。
b.Lyso-Tracker Red工作液使用前需37℃預溫育。
注:工作液中Lyso-Tracker Red的濃度可以根據實際情況進行適當調整。為降低背景,在染色效果可以接受的范圍內,建議盡量使用較低濃度的Lyso-Tracker Red。
2.溶酶體的熒光標記:
a.去除細胞培養液,加入步驟1配制好的并37℃預溫育的Lyso-Tracker Red染色工作液,與細胞37℃共孵育5-60分鐘。
b.去除Lyso-Tracker Red染色工作液,加入新鮮的細胞培養液。
c.隨后通常用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡進行觀察。此時可觀察到溶酶體呈明亮的強熒光染色。如果染色效果欠佳,可以提高Lyso-Tracker Red染色工作液中Lyso-Tracker Red的濃度或在推薦的時間范圍內適當延長染色時間。