產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
MTT 比色法是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法，MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測(cè),MTT檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色Formazan并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能，在特定溶劑存在的情況下可以被完全溶解，然后通過(guò)酶標(biāo)儀可以測(cè)定570nm波長(zhǎng)附近的吸光度，細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高;細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。雅吉生物 MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒采用了自主研發(fā)FormazanSolvent，使檢測(cè)本底低，靈敏度高，線性范圍寬。
該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
自備材料:
1、細(xì)胞培養(yǎng)液、胰蛋白酶消化液
2、低速離心機(jī)、96孔培養(yǎng)板、細(xì)胞計(jì)數(shù)板或計(jì)數(shù)器、搖床、顯微鏡、酶標(biāo)儀
操作步驟(僅供參考):
1、細(xì)胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞(懸浮細(xì)胞無(wú)需消化)。
2、低速離心，收集細(xì)胞沉淀。
3、用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。
4、細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，一般接種密度為3000～10000個(gè)細(xì)胞/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加3000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入6000個(gè)細(xì)胞，具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定。
5、37℃ 5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)或按照實(shí)驗(yàn)具體需要進(jìn)行培養(yǎng)，一般培養(yǎng)6~24h。
6、按照實(shí)驗(yàn)具體要求，給予0～20ul干預(yù)藥物處理，37°C 5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)至合適時(shí)間。
7、棄培養(yǎng)液，每孔加入10ul MTT Solution和100ul新鮮培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育4h。
8、棄培養(yǎng)液，每孔加入110ul Formazan Solvent，置搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解;如果紫色結(jié)晶較小或較少，溶解的時(shí)間會(huì)短一些;如果紫色結(jié)晶較大或較多，溶解的時(shí)間會(huì)長(zhǎng)一些。
9、在酶標(biāo)儀570nm測(cè)定各孔吸光度。
注意事項(xiàng):
1、MTT Solution(5mg/ml)為黃色，需避光保存，長(zhǎng)時(shí)間光照會(huì)導(dǎo)致失效。盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效，當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請(qǐng)勿使用。
2、由于使用96孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，應(yīng)注意蒸發(fā)問(wèn)題。
3、MTT Solution在低溫情況下會(huì)凝固，置于室溫或20～25°C℃水浴至全部融解后使用。
4、Formazan Solvent 可以-20°C儲(chǔ)存，當(dāng)產(chǎn)生沉淀或凝固時(shí)可以37C水浴孵育以促進(jìn)溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。
5、觀察Formazan是否完全溶解，亦可以借助光學(xué)顯微鏡觀察。6、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)盡量細(xì)菌避免污染。
7、應(yīng)注意設(shè)立OD調(diào)零孔和對(duì)照。
8、試劑開(kāi)封后請(qǐng)盡快使用，以防影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)效果。
9、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期:12個(gè)月有效。
低溫運(yùn)輸,按要求保存。
