BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒(BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit)是一種用于免疫組化顯
色、Western等膜顯色和誘導多功能干細胞iPS鑒定等的試劑盒。
堿性磷酸酯酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)常被稱作堿性磷酸酶(EC 3.1.3.1)，是一類水解酶，通過水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基，其去磷酸化作用的底物包括核苷酸、蛋白質和生物堿等，并在堿性條件下最為有效。該酶是一組同功酶的統稱。常見的小牛腸堿性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline
Phosphatase, CIAP/CIP)被廣泛用于二抗等的標記最終用于蛋白和核酸等的檢測，也常用于DNA或RNA 5’和3’末端的去磷酸
化(去單磷酸化)，特別是質粒的5’末端去磷酸化以避免質粒自連等。
BCIP/NBT是堿性磷酸酯酶的常用底物。在堿性磷酸酯酶的催化下，BCIP會被水解產生強反應性的產物，該產物會和NBT發生反應，形成不溶性的深藍色至藍紫色的NBT-formazan。
本試劑盒可以用于細胞或組織的堿性磷酸酯酶顯色包括誘導多功能干細胞iPS的鑒定，也可以用于Western等結合有堿性磷酸酯酶的膜的顯色檢測。同時也可以用于細胞或組織內源性的堿性磷酸酯酶顯色。
有Nature論文注明使用了本試劑盒，參考使用本產品的文獻2。
包裝清單：
| 產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
| C3206-1 | 堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 | 100ml |
| C3206-2 | BCIP溶液(300X) | 350μl |
| C3206-3 | NBT溶液(150X) | 700μl |
| － | 說明書 | 1份 |
保存條件：
4℃保存，一年有效。BCIP溶液和NBT溶液需避光保存。
注意事項：
BCIP對人體有刺激性，NBT對人體有害，請注意適當防護。
本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 對于組織切片或細胞樣品或膜，在與堿性磷酸酯酶標記的抗體或其它形式的探針孵育后，用適當洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。對于檢測內源性堿性磷酸酯酶的組織或細胞樣品，在適當固定后，也用適當洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。
2. 按照如下比例依次加入各溶液，混勻后即配制成BCIP/NBT染色工作液：
| 堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 | 3ml | 10ml |
| BCIP溶液(300X) | 10μl | 33μl |
| NBT溶液(150X) | 20μl | 66μl |
| BCIP/NBT染色工作液 | 3.03ml | 10.1ml |
3. 最后一次洗滌完畢后，去除洗滌液，加入適量BCIP/NBT染色工作液，確保能充分覆蓋樣品。
4. 室溫避光孵育5-30分鐘或更長時間(可長達24小時)，直至顯色至預期深淺。
5. 去除BCIP/NBT染色工作液，用蒸餾水洗滌1-2次即可終止顯色反應。
6. 對于組織切片或細胞樣品，顯色反應終止后，如有必要可以用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色，以便于觀察。對于膜，顯色反應終止后，可以室溫晾干避光保存。
