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pRD29B-luc(植物報告基因質粒)

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 pRD29B-luc(植物報告基因質粒)是自行研發的植物(如擬南芥等)原生質體瞬時轉染螢火蟲螢光素酶(firefly luciferase)報告基因質粒。質粒為氨芐青霉素抗性。

pRD29B-luc載體中Luciferase基因由RD29B誘導型啟動子驅動表達。RD29B為擬南芥在脫水,低溫或高鹽條件下誘導表達的基因,其編碼的親水性蛋白可以提高植物在以上逆境條件下的耐性。RD29B promoter是目前常用的逆境誘導型啟動子,在脫落酸(Abscisic Acid,ABA)(ST1751)誘導的情況下,luciferase的表達水平可以大大增強。如果由花椰菜花葉病毒35S(CaMV35S)組成型強啟動子啟動GUS基因的表達,會增加植物的代謝負擔,造成大量物質和能量的浪費,并進而影響植物正常的生長發育;而RD29B promoter啟動子不僅可以高效啟動下游基因的表達,也可以比較好的規避CaMV35S的缺點。

pRD29B-luc中RD29B promoter的上下游有數個酶切位點,可利用其對RD29B promoter進行其它啟動子的替換,用以研究感興趣的啟動子的功能。

pRD29B-luc載體僅保留植物瞬時轉化所需元件,結構精簡,避免由于載體過大導致原生質體轉化效率降低。此載體不可用于植物穩定遺傳株系的構建。

pRD29B-luc采用來自根瘤農桿菌的胭脂堿合成酶基因終止子(nopaline synthase terminator,NOS-T),用于終止RNA聚合酶轉錄,對目的基因的表達進行調控。

pRD29B-luc質粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
Ampicillin resistance ORF 137-997
Ampicillin promoter 998-1102
M13 forward primer(M13 fwd) 1576-1592
RD29B promoter 1646-2226
Luciferase 2229-3881
NOS terminator 4036-4288
M13 reverse primer(M13 rev) 4307-4323
lac operator 4331-4347
lac promoter 4355-4385
CAP binding site 4400-4421
pUC origin 4709-5297

pRD29B-luc質粒(5479bp)的圖譜如下:

pRD29B-luc的詳細圖譜見說明書:https://www.beyotime.com/Manual/D2489 pRD29B-luc(植物報告基因質粒).pdf

pRD29B-luc中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pRD29B-luc)包括:

Acc65I AccI AfeI AgeI AleI ApaI AscI
AsiSI AvrII BaeI BbvCI BclI BlpI BmtI
Bpu10I BsgI BsmI BstXI BstZ17I EagI FseI
HpaI KpnI MluI MscI NaeI NgoMIV NheI
NotI NruI PaeR7I PflFI PflMI PmeI PmlI
PshAI PspOMI PspXI RsrII SacII SalI SexAI
SfiI SmaI SnaBI SpeI SrfI StuI SwaI
TspMI Tth111I XhoI XmaI      

pRD29B-luc中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pRD29B-luc once)包括:

AatII G,ACGT`C 1128 DraIII CAC,NNN`GTG 1884
AflII A`CRYG,T 4065 EcoNI CCTNN`N,NNAGG 3846
AhdI GACNN,N`NNGTC 211 EcoRV GAT|ATC 3567
AlwNI CAG,NNN`CTG 5061 HincII GTY|RAC 3533
AvaI C`YCGR,G 3285 HindIII A`AGCT,T 1597
BamHI G`GATC,C 1622 NcoI C`CATG,G 2228
BfuAI ACCTGCNNNN`NNNN, 3627 NmeAIII GCCGAG(N)19,NN` 357
BglII A`GATC,T 4285 NsiI A,TGCA`T 4152
BmgBI CAC|GTC 2030 PacI TTA,AT`TAA 3551
BsaBI GATNN|NNATC 4099 PpuMI RG`GWC,CY 3408
BsaI GGTCTCN`NNNN, 272 PsiI TTA|TAA 2554
BseRI GAGGAG(N)8,NN` 3782 PstI C,TGCA`G 1613
BsoBI C`YCGR,G 3285 SbfI CC,TGCA`GG 1608
BspMI ACCTGCNNNN`NNNN, 3627 ScaI AGT|ACT 691
BsrGI T`GTAC,A 2719 SgrAI CR`CCGG,YG 3657
BstAPI GCAN,NNN`NTGC 1379 StyI C`CWWG,G 2227
BstEII G`GTNAC,C 2837 XcmI CCANNNN,N`NNNNTGG 2963
Bsu36I CC`TNA,GG 2842 XmnI GAANN|NNTTC 809
BtgI C`CRYG,G 2227 ZraI GAC|GTC 1130
CspCI ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 1904      

pRD29B-luc質粒可使用的測序引物序列如下:

M13 forward primer(1576-1592): 5’-GTAAAACGACGGCCAGT-3’

luc promoter primer(2558-2274): 5’-GATAGAATGGCGCCGGG-3’

pRD29B-luc的全序列信息:D2489 pRD29B-luc.txt

包裝清單:

產品編號 產品名稱 包裝
D2489-1µg pRD29B-luc 1μg
D2489-100µg pRD29B-luc 100μg
說明書 1份

保存條件:

-20℃保存。

注意事項:

本質粒未經書面許可不得用于任何商業用途,也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。

本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。

為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明:
1.首次使用1µg包裝的本產品時,請先取少量本質粒轉化大腸桿菌,進行質粒小量、中量或大量抽提后再用于后續用途。抽提獲得的質粒可以通過酶切電泳進行鑒定,或通過測序進行鑒定。
2.100µg包裝的本產品質粒濃度為0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切,用于擬南芥原生質體轉化需進行質粒大量抽提。

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